DNA 转染实验

实验分类：

细胞实验

别名：

transfection，基因转染

最新修订时间：2022-02-10

简介

运用物理或化学方法将外源 DNA 导入细胞的过程，称为 DNA 转染或基因转染(transfection)。采用该技术，既可将外源基因导入体外生长的细胞，用于研究基因的表达调控，亦可将外源基因导入体内细胞，用于基因治疗。基因转染方法包括磷酸钙转染法、脂质体转染法、DEAE-葡聚糖转染法、重组 DNA 病毒感染法、电穿孔法和显微注射法等。

原理

磷酸钙转染法的原理是在 pH 7.1 环境中，DNA 分子带负电荷，在静电引力的作用下，带正电荷的粒子可与 PO 结合。当在溶液中加入 CaCl2 时，PO- 与 Ca2+ 形成磷酸钙,并与 DNA 共沉淀。待转染细胞可吞噬这些 DNA 沉淀，从而使 DNA 进入转染细胞中。

脂质体转染法的原理是脂质体(liposomes)是由脂质双分子层组成的、内部为水相的闭合囊泡结构。在脂质体的水相和膜内可包裹多种物质。DNA 与脂质体混合后可被包裹在脂质体的水相中。当脂质体与转染细胞的细胞膜相接触时，其脂质双分子层与细胞膜融合，脂质体水相中 DNA 进入细胞内部，细胞被转染。

电穿孔转染法的原理是利用脉冲电场将 DNA 导入培养细胞，当细胞处于较高电压的电场中时，瞬间的电脉冲可将细胞膜穿孔，处于电场中的 DNA 得以进入细胞。常见的电穿孔仪根据其不同放电波形分为两种类型：一种是方波放电,另一种是指数衰减波放电。电穿孔法所需的 DNA 量较少，转染的效率也比较高。由于电穿孔是一种物理方法，较少依赖细胞类型，可广泛应用于各种细胞的转染，包括细菌、酵母、植物和动物细胞；而且，电穿孔法与用化学物质或病毒法进行转染相比，几乎没有生物或化学副作用。该法的缺点是对设备条件要求较高，而且不同的细胞对电压的高低、电脉冲的长短要求不一样，要达到最佳效果，需要进行预实验加以确定。

来源：丁香实验团队

操作方法

🔥 磷酸钙转染法

运用物理或化学方法将外源 DNA 导入细胞的过程，称为 DNA 转染或基因转染（transfection）。采用该技术，既可将外源基因导入体外生长的细胞，用于研究基因的表达调控，亦可将外源基因导入体内细胞，用于基因治疗。磷酸钙转染法操作简单，无需昂贵的仪器设备，成本较低，已被许多实验室广泛采用。

脂质体转染法

运用物理或化学方法将外源 DNA 导入细胞的过程，称为 DNA 转染或基因转染(transfection)。采用该技术,既可将外源基因导入体外生长的细胞，用于研究基因的表达调控，亦可将外源基因导入体内细胞，用于基因治疗。脂质体转染法操作简单，无需昂贵的仪器设备，成本较低，已被许多实验室广泛采用。

电穿孔转染法

运用物理或化学方法将外源 DNA 导入细胞的过程，称为 DNA 转染或基因转染(transfection)。采用该技术，既可将外源基因导入体外生长的细胞，用于研究基因的表达调控，亦可将外源基因导入体内细胞，用于基因治疗。电穿孔法转染效率较高，但需要昂贵的仪器。