检测服务丨细胞转染实验

细胞转染实验

转染实验旨在将外源核酸（DNA或RNA）导入真核细胞中，从而改变细胞的遗传特性或研究基因表达。这项技术广泛应用于基因功能研究、蛋白表达、基因治疗等领域。

一、原理：

转染基于细胞膜的特性，通过物理、化学或生物方法将外源核酸送入细胞内。在细胞内，这些外源核酸可以被转录和翻译成蛋白质，或整合到细胞基因组中稳定表达。

转染分为瞬时转染和稳定转染，前者外源基因不整合到基因组，表达短暂；后者则整合到基因组，实现长期表达。

二、材料与仪器：

实验试剂：

培养基、血清、PBS、胰酶等。

实验仪器：

移液器、二氧化碳培养箱、倒置荧光显微镜、荧光酶标仪、超净工作台、离心机等。

三、实验步骤：

1、转染前一天，在6孔板中接种细胞悬液1 mL/孔，细胞的接种数量为5x10^5个细胞/孔，1 mL 含 FBS和抗生素的 DMEM细胞培养基；

2、24小时内细胞汇合达到 60-80%，用于转染；

3、将siRNA-Mate转染试剂放置于室温中，使用前轻轻混匀；

4、将200 μL 无血清培养基加入无菌EP管中；在EP管中加入100 pmol待转染的siRNA,并充分混匀。随后在管子中加入10 μL siRNA-Mate转染试剂，快速涡旋10s使其完全混匀；

5、室温静置10分钟，使siRNA和转染试剂形成转染复合物。静置时间在30分钟内。

6、趁静置时，给6孔板换液，每孔换上1.8 mL预热的新鲜培养基；

7、将静置完毕的200 μL转染复合物加入孔中。

8、37℃静置培养细胞，24h后收细胞检测基因沉默水平及各组指标表达情况。

※实验示例：

转染敲低

转染过表达

四、注意事项

1、质粒质量：

使用高纯度、无菌、无内毒素的质粒进行转染，以确保转染效率和细胞健康。

2、转染条件优化：

通过预实验确定最佳的转染条件，包括转染试剂与质粒的比例、细胞密度、转染时间等。

3、无菌操作：

整个转染过程应在无菌条件下进行，避免污染。