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- 2026年01月20日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 提供商：
上海达为科生物科技有限公司
- 服务名称：
MTT检测实验
一、实验原理
- 酶促反应
活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能将MTT（噻唑蓝）还原为蓝紫色水不溶性的甲瓒结晶（Formazan），而死细胞无此功能。 - 检测方法
通过二甲基亚砜（DMSO）溶解甲瓒后，用酶标仪在490/570nm波长下测量吸光度（OD值），OD值与活细胞数量正相关。
二、实验步骤（以贴壁细胞为例）
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细胞接种
- 调整细胞悬液浓度至5×10⁴~1×10⁵个/mL，每孔接种100μL（96孔板）。
- 37℃、5% CO₂培养16-48小时，待细胞贴壁。
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药物处理
- 加入不同浓度药物，继续培养24-72小时（根据实验目的调整时间）。
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MTT孵育
- 每孔加入20μL MTT溶液（终浓度0.5 mg/mL），避光培养4小时。
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溶解与检测
- 弃去培养液，每孔加150μL DMSO，振荡溶解甲瓒结晶。
- 用酶标仪测定490/570nm处的吸光度，计算细胞增殖率或存活率。
三、注意事项
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关键操作要点
- 空白对照：设置不含细胞的孔（含培养基和MTT）以校准背景值。
- 细胞密度：贴壁细胞建议密度为1×10⁴~1×10⁵个/孔，过高或过低均影响准确性。
- 避光保存：MTT溶液需现用现配或分装避光保存（4℃两周内有效，-20℃长期保存）。
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局限性
- 需溶解甲瓒结晶，步骤繁琐且有机溶剂对实验者有害。
- 仅反映细胞相对数量和活力，无法测绝对数量。
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文献和实验MTT实验是检测细胞活力的实验方法，由于细胞活力与细胞数呈正相关，因此也常常用来检测细胞的增殖情况。MTT的原理：活细胞有琥珀酸脱氢酶，将MTT还原成棕褐色沉淀。由于一般介绍园子里已经很多，笔者将自己的心得按照实验流程与大家交流交流。1、培养好细胞点板。养细胞没啥好说的，如果不知道细胞如何养，那就看看相关的文献方法。如果知道了细胞的名字，就可以上www.atcc.org检索细胞的培养信息，这个网站上的培养方法是标准培养方法。当然可以根据自己实验要求进行修改。由于细胞计数很繁琐，点板时的细胞
一、实验前应明确的问题 1. 选择适当的细胞接种浓度。 一般情况下，96孔培养板的一内贴壁细胞长满时约有105个细胞。但由于不同细胞贴壁后面积差异很大，因此，在进行MTT试验前，要进行预实验检测其贴壁率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线，确定试验中每孔的接种细胞数和培养时间，以保证培养终止致细胞过满。这样，才能保证MTT结晶形成酌量与细胞数呈的线性关系。否则细胞数太多敏感性降低，太少观察不到差异。 2. 药物浓度的设定。 一定要多看文献，参考别人的结果再定
着食品行业又一轮安全大作战拉开序幕。 通微公司，作为国内优秀的色谱分析仪器、耗材生产及方法应用提供商，依托强大的研发优势，应用EasySep-1020液相色谱系统和HALO C18色谱柱，建立一种用反相高效液相色谱测定食品中9种合成食用色素的分析方法。 该方法可测定9种合成食用色素：柠檬黄、新红、苋菜红、靛蓝胭脂红、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝、赤藓红。9种合成食用色素8 min内完成分离检测，样品加样回收率高87.3%~101.7%。这一系统及方法操作简便快速
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