细胞MTT检测

一、定义与基本原理

细胞MTT检测是一种通过测量细胞代谢活性间接评估细胞活力、增殖或毒性的实验方法。其核心原理基于活细胞线粒体中的脱氢酶（如琥珀酸脱氢酶）将黄色水溶性MTT（3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四氮唑溴盐）还原为蓝紫色水不溶性甲臜（Formazan）结晶，而死细胞无此能力。生成的甲臜量与活细胞数量正相关，通过溶解甲臜后测定吸光度（通常为570 nm）即可量化细胞活性。

关键点：

1. 酶依赖性：反应依赖于线粒体脱氢酶的活性，仅活细胞参与。
2. 检测范围：吸光度线性范围为0-0.7，超出此范围需调整细胞浓度或孵育时间。
3. 局限性：仅反映相对细胞活力，无法测定绝对细胞数。

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二、实验步骤详解

标准流程（以96孔板为例）：

1. 细胞接种：
   • 贴壁细胞：以1000-10000个/孔的密度接种于含100-200 μL培养基的孔中，培养至贴壁（通常24小时）。
   • 悬浮细胞：需优化密度以避免沉淀干扰，部分实验需离心后处理。
2. 干预处理：
   • 加入不同浓度药物或实验条件，继续培养（通常24-48小时）。

3. MTT孵育：

 

• 每孔加入10 μL MTT溶液（终浓度0.5-1 mg/mL），37℃孵育2-5小时。
• 注意：MTT需现配现用，避光保存，过滤除菌。

1. 溶解甲臜：

   • 吸弃培养基（悬浮细胞需离心），每孔加入100-150 μL DMSO或专用溶解液，震荡10-30分钟至结晶完全溶解。

2. 吸光度测定：

   • 使用酶标仪在570 nm（主波长）和630 nm（参考波长）测定吸光度，计算细胞活力。

特殊处理：

• 标准曲线：通过梯度稀释细胞建立标准曲线，提高定量准确性。
• 药物干扰排除：若药物本身有颜色，需设置未加MTT的对照组校正背景值。

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三、应用场景

1. 药物筛选：评估化合物对肿瘤细胞的毒性或促增殖作用，常用于抗肿瘤药物开发。
2. 细胞毒性测试：检测医疗器械材料、环境毒素或化疗药物的细胞毒性。
3. 放射敏感性评估：分析肿瘤细胞对放疗的响应。
4. 免疫学研究：测定淋巴细胞增殖反应（如LAK/TIL细胞活性）。
5. 微生物活力检测：扩展应用于细菌、真菌等微生物的代谢活性分析。