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- 2025年12月29日
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细胞增殖实验/MTT检测
一、技术简介
细胞增殖是生物体的重要生命特征，细胞以分裂的方式进行增殖。单细胞生物，以细胞分裂的方式产生新的个体。多细胞生物，以细胞分裂的方式产生新的细胞，用来补充体内衰老和死亡的细胞；同时，多细胞生物可以由一个受精卵，经过细胞的分裂和分化，最终发育成一个新的多细胞个体。必须强调指出，通过细胞分裂，可以将复制的遗传物质，平均地分配到两个子细胞中去。可见，细胞增殖是生物体生长、发育、繁殖和遗传的基础。真核细胞的分裂方式有三种，即有丝分裂、无丝分裂和减数分裂。
MTT是3-(4,5-dimethyl-thiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide的简称。活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。然后采用二甲基亚砜（DMSO）溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在570 nm波长处测定其光吸收值，反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
二、实验流程（以贴壁细胞为例）
1. 收集对数期细胞，调整浓度。
2. 将细胞种植于96孔板中，待细胞贴壁后（约4-12 h）加药。
3. 5% CO2，37 oC孵育一定时间。
4. 每孔中加入200 μL MTT溶液（配制成5 mg/ml），培养4 h。
5. 吸去孔内的培养液，加入150 μL DMSO，可继续孵育4 h，使结晶物充分溶解。
6. 取出96孔板，将其置于酶联免疫检测仪上，震荡15 s，然后在570 nm下测量吸光值。
7. 结果统计分析。
三、服务说明及结果
1. 客户提供：培养好的细胞和作用药物。
2. 公司提供：原始数据及分析结果、完整的实验报告。
3. 实验周期：10个工作日，具体需要根据细胞生长情况及实验内容而定。
【欢迎来电/邮件咨询】
联系人：刘经理
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文献和实验tongenjuan 我想要研究肿瘤细胞在药物及照射的情况下，其细胞的生长情况。考虑到一块板上不能同时做药物及照射，因为照射一部分孔时不能保证药物组不受射线影响；而且如果分为2块版的话，只能分别检测，结果比较就没有意义了。因此想询问一下除了MTT法，还有没有其他的方法可以检测到细胞生长抑制情况 湘洋剑客 貌似必须两块板 不用MTT，CCK8也行 流式ELISA蛋白
和10μl MTT染液，在37℃ 5％ CO 2 的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养4～6小时。 5．每孔加0.1ml酸化异丙醇，也可用含10％ SDS 的10mmol/L HCl代替酸化异丙醇，在振荡器上振荡混匀，让还原产物充分溶解。置酶联检测仪上测定光密度（OD）值，检测波长570nm，参考波长630nm。以OD值对样品稀释度作图，比较标准曲线和待测样品曲线即可求得待测样品中细胞因子的含量。
对照孔，每孔加0.1ml RPMI-1640培养液。在37℃ 5％ CO2 的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养24～48小时或预定的时间。3、吸去培养液，用PBS洗涤一次（如为悬浮细胞，应在吸去上清液前离心培养板）。4、每孔加0.1ml PBS和10μl MTT染液，在37℃ 5％ CO2 的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养4～6小时。5、每孔加0.1ml酸化异丙醇，也可用含10％ SDS的10mmol/L HCl代替酸化异丙醇，在振荡器上振荡混匀，让还原产物充分溶解。置酶联检测仪上测定光密度（OD）值，检测
