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- 2026年01月26日
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上海达为科生物科技有限公司
- 服务名称：
细胞周期实验
一、实验原理与生物学意义
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细胞周期定义
- 指细胞从一次分裂结束到下一次分裂结束的全过程，包含 间期（G1/S/G2） 和 分裂期（M） 。
- G0期：暂不增殖的休眠状态（如干细胞或分化细胞）。
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检测核心目标
- 量化各时期细胞比例（G0/G1, S, G2/M）
- 计算细胞周期时长（如S期DNA复制时长）
- 分析药物/基因扰动对周期进程的影响
二、主流检测方法对比与选择
| 方法 | 原理 | 优势 | 局限 | 适用场景 | 来源 |
|---|---|---|---|---|---|
| 流式细胞术（PI染色） | PI结合DNA双链，荧光强度∝DNA含量 | 高通量（单次10⁴细胞）、快速 | 无法区分G0/G1期 | 基础药物筛选、周期比例分析 | |
| BrdU/EdU渗入法 | 核苷类似物标记S期DNA，抗体/荧光检测 | 特异性标记复制期细胞 | 需额外染色步骤 | S期时长计算、复制动力学 | |
| FUCCI荧光报告系统 | 荧光蛋白标记周期蛋白（Cdt1-G1红, Geminin-S/G2绿） | 实时活细胞追踪周期进程 | 需转基因构建 | 动态周期调控机制研究 | |
| 同位素标记法 | ³H-胸苷掺入DNA，放射自显影 | 金标准、高灵敏度 | 放射性危害、操作复杂 | 传统方法验证 |
选择建议：
- 常规比例分析 → PI流式法（经济高效）
- S期动态追踪 → BrdU/EdU双标记法
- 活细胞成像 → FUCCI系统
三、标准化操作流程（以流式PI法为例）
1. 实验准备
- 细胞要求：
- 对数生长期细胞（活力＞90%）
- 样本量：≥1×10⁶细胞/组（避免碎片干扰）
- 关键试剂：
- PI染色液（含RNase A，终浓度50μg/mL）
- 70%预冷乙醇（固定剂）
2. 操作步骤
- 胰酶消化 → PBS轻柔洗涤2次（1200rpm, 5min）
*注意：避免机械损伤产生碎片*
2. **固定**：
- 逐滴加入70%冷乙醇（-20℃预冷），4℃固定≥2h
3. **染色**：
- 离心弃乙醇 → PBS洗1次 → 加PI/RNase混合液（避光孵育30min, RT）
4. **上机检测**：
- 300目滤网过滤 → 流式细胞仪检测（激发488nm，发射610nm）
*关键参数*：
- 流速：低速（≤100事件/秒）→ 降低CV值
- 排除粘连体：设门FSC-A vs FSC-H
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文献和实验chenjun98ji 谁有关于CDC25C在细胞周期调控的线路图 lwjssry ......................... lwjssry .......................... 本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴 师兄微信号：shixiongcoming
yanjing2001 我用药物处理细胞后，流式检测细胞周期，G1期增加，S期减少，G2基本没有什么变化 问题一：这是说明药物把细胞阻滞在G1期吗？ 问题二：把细胞阻滞在G1期与G1/S期阻滞是相同的意思吗？ 问题三：想进一步通过western blot 检测cyclin确定G1期阻滞，应该检测cyclin d,还是cyclin d1呢，为什么 请大家帮忙！ sunzhihong490
增殖的，如：外周血淋巴细胞在正常情况下基本都是不会进行增殖的，处于 G0 期。 此外，如果细胞培养条件不对或营养不足，引起细胞生长缓慢，也会导致大量细胞进入 G0 期。此时需及时优化培养条件，否则时间一长会引起细胞状态变差，直至细胞死亡。 很多细胞生长密度过高，会出现接触抑制，同样会导致 G2/M 期缺失。当细胞产生接触抑制，就无法再增殖——因此，如果实验处理组是促进细胞生长，或导致 G2/M 期阻滞，有可能会出现完全检测不出来的情况，严重影响对实验结果的判断。所以，在进行细胞周期实验时
