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- 上海
- 2026年01月04日
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上海达为科生物科技有限公司
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成年小鼠关节软骨细胞原代培养实验
传统培养方法体外培养的软骨细胞经长时间传代培养后往往去分化为成纤维细胞,导致细胞数量及活性下降.如何避免培养过程中的去分化问题,是模拟体内软骨内成骨软骨发育过程的关键.
成年小鼠关节软骨细胞原代培养
- C57小鼠，8-10周，通过颈椎脱位处死，浸入75%乙醇浸泡5分钟，转移到通风柜中的解剖盘中。
- 使用眼科剪和镊子，使髋关节脱臼，保持股骨头完整。
- 用止血钳去除每个股骨头的软骨帽，将组织放入含2%双抗的PBS中。
- 用冰冷的含2%双抗的PBS清洗2-3遍，将关节软骨小心移到2ml离心管中。
- 用眼科剪刀将软骨帽剪成约1mm3的碎片，加入3ml预热的Collagenase D（1.5mg/ml）。
- 放入37℃、80rpm的摇床中进行第一次消化，时间2h 。
- 第一次消化结束后，加入含血清的培养基终止消化，40um的细胞筛过滤后，离心1500rpm，2min。
- 沉淀用DMEM完全培养基重悬，计数，种植在24孔板中。
- 在未消化的组织中加入3ml预热的Collagenase D，放入37℃、80rpm的摇床中进行第二次消化，时间2h，然后收集细胞。
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文献和实验以兔软骨细胞为例： ①一般根据实验要求，选取不同年龄组的兔子，实际上兔子的年龄越小越好，毕竟幼体组织的活力要高于成体组织的活力，耳静脉空气注射法处死后,无菌条件下分离后肢关节软骨和肋软骨，剥离包裹软骨组织的筋膜和软骨膜，放入盛有PBS液的培养皿中。 ②将分离得到的软骨组织剁碎成0.3-0.5mm的组织块，移入25cm2培养瓶，用含双抗的PBS液冲洗软骨3次。 ③加入软骨体积10-15倍的0.25%胰蛋白酶，37℃消化１－２小时后终止消化。 ④加入0.02%II型胶原
以兔软骨细胞为例： ①一般根据实验要求，选取不同年龄组的兔子，实际上兔子的年龄越小越好，毕竟幼体组织的活力要高于成体组织的活力，耳静脉空气注射法处死后,无菌条件下分离后肢关节软骨和肋软骨，剥离包裹软骨组织的筋膜和软骨膜，放入盛有PBS液的培养皿中。 ②将分离得到的软骨组织剁碎成0.3-0.5mm的组织块，移入25cm2培养瓶，用含双抗的PBS液冲洗软骨3次。 ③加入软骨体积10-15倍的0.25%胰蛋白酶，37℃消化１－２小时后终止消化。 ④加入0.02%II型胶原
实验材料： 1.软骨细胞来源：动物材料可选用未成年兔的膝关节、鸡胚胸软骨。人体材料可取自引产胎儿或成年人手术切除的软骨标本； 2.清洗液：不含Ca2+ 和Mg2+ 的1×PBS，添加100IU/ml青霉素、100μg/ml链霉素，pH7.2； 3.消化液：0.2%胶原酶Ⅱ溶液，用PBS液配制，过滤除菌； 4.培养液：RPMI1640或Ham F12、DMEM培养基，一般在培养液中加20%—30
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