上海细胞粘附实验

一、细胞粘附实验的定义与目的

1. 定义
   细胞粘附实验是研究细胞与细胞间（cell-cell adhesion）或细胞与细胞外基质（ECM）间（cell-ECM adhesion）相互作用的技术，通过量化粘附强度或形态变化，揭示粘附分子（如整合素、钙黏蛋白）的调控机制。
   • 粘附类型：

• 静态粘附：适用于上皮细胞、成纤维细胞等与ECM的粘附（如肿瘤转移研究）。
• 流动粘附：模拟血流环境，分析血细胞（如白细胞）与内皮细胞的动态粘附（如炎症反应）。

1. 研究目的
   • 解析粘附分子（如ICAM-1、LFA-1）在胚胎发育、免疫应答、肿瘤转移中的作用。
   • 评估药物处理、基因突变（如DSG2 KO）或病理条件（如心肌病、关节炎）对粘附能力的影响。
   • 筛选促粘附/抑粘附化合物（如高通量药物筛选）。

二、实验技术方法

（一）常用技术分类

注：静态实验多用96孔板（如结晶紫染色），动态实验需专用设备（如ibidi流体系统）。

（二）操作流程（以细胞-基质粘附为例）

1. 基质包被：

   • 用纤连蛋白（FN，10 μg/mL）或层粘连蛋白（LN）包被96孔板（70 μL/孔），4℃过夜。
   • 关键步骤：1% BSA 37℃封闭1小时，阻断非特异性结合位点。

2. 细胞准备：

   • 胰酶消化对数生长期细胞，无血清培养基重悬，调整浓度至5×10⁵ cells/mL（血球计数板确认）。
   • 注意事项：悬浮细胞需避免过度消化（0.05%胰酶，5分钟）。

3. 粘附反应：

   • 接种细胞（5000 cells/孔），37℃孵育1小时。
   • 动态条件：使用微流控装置施加剪切力（如10 dyn/cm²），模拟生理环境。

4. 结果检测：

   方法	操作	优势
   结晶紫染色法	固定（5%戊er醛）→染色（0.1%结晶紫）→溶解（10%乙酸）→酶标仪测OD₅₉₅	高通量、成本低
   Calcein-AM荧光法	活细胞荧光标记→清洗未粘附细胞→荧光酶标仪检测	避免固定步骤，活细胞实时监测
   显微镜计数法	吉姆萨染色→随机选取5视野计数粘附细胞数	直接观察形态，适合少量样本
   CellTiter-Glo法	检测ATP含量量化活细胞数，避免染色偏差	高灵敏度，兼容高通量筛选