- ￥1952
- 翌圣生物（Yeasen）
- 11301ES12
- 上海翌圣
- 2025年10月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
大量
- 英文名：
Hifair® V Reverse Transcriptase
- 保质期：
有效期6个月
- 供应商：
翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 保存条件：
4℃保存
- 规格：
12KU
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 |
| Hifair® V Reverse Transcriptase 第五代耐热逆转录酶（无甘油版） | 11301ES12 | 12 KU | 1952.00 |
| Hifair® V Reverse Transcriptase 第五代耐热逆转录酶（无甘油版） | 11301ES75 | 300 KU | 28652.00 |
产品描述
Hifair® V Reverse Transcriptase是在Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase基础上通过基因工程技术得到的全新逆转录酶，与Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase相比，其热稳定性大幅度提高，可耐受高达60℃的反应温度，适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时，该酶增强了与模板的亲和力，适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。Hifair® V Reverse Transcriptase合成全长cDNA的能力也有了提升，可扩增长达10 kb的cDNA。
产品组分
| 编号 | 组分 | 产品编号/规格 | |
| 11301ES12 (12 KU) | 11301ES75 (300 KU ) | ||
| 11301-A | Hifair® V Reverse Transcriptase (600 U/μL) | 20 μL | 500 μL |
产品应用
一步法RT-qPCR；基因克隆；荧光定量。
活性定义
以Poly(A) .Oligo(dT)为模板-引物，在37℃，10 min内，将1 nmol的dTTP掺入为酸不溶性物质所需要的酶量定义为1个活性单位（U）。
质量控制
核酸外切酶残留检测：200 U本酶和1 μg λDNA-Hind Ⅲ，37℃下孵育1 h，DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸内切酶残留检测：200 U本酶和1 μg Supercoiled pBR322 DNA，37℃下孵育1 h，DNA的电泳谱带不发生变化。
RNase残留检测：200 U本酶和1 μg小鼠肝脏总RNA，37℃下孵育1 h，RNA电泳谱带不发生变化。
运输与保存方法
冰袋运输。4℃保存。效期6个月。
注意事项
1）请保持实验区域洁净；操作时需穿戴干净的手套、口罩；实验所用耗材均需保证RNase free，以防止RNase污染；
2）所有操作均应在冰上进行，防止RNA降解；
3）为保证高效率逆转录，建议使用高质量的RNA样本；
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
第一链cDNA合成操作步骤
1. RNA变性（此步为可选步骤，RNA变性有助于打开二级结构，可在很大程度上提高第一链cDNA的产量。）
| 组分 | 使用量 |
| RNase free ddH2O | To 13 μL |
| Oligo (dT)18 (50 μM) or Random Primers (50 ng/μL) or Gene Specific Primers (2 μM) |
1 μL |
| or 1 μL | |
| or 1 μL | |
| 模板RNA | Total RNA: 1 ng -5 μg或mRNA:1 ng-500 ng |
2. 逆转录反应体系配制（20 μL体系）
| 组分 | 使用量 |
| 上一步的反应液 | 13 μL |
| 5×Hifair® V Buffer | 4 μL |
| dNTP Mix (10 mM) | 1 μL |
| Hifair® V Reverse Transcriptase (600 U/μL) | 200 U |
| RNase inhibitor (40 U/µL) | 1 μL |
| RNase free ddH2O | To 20 μL |
| 温度 | 时间 |
| 25℃ | 5 min |
| 42℃ | 15-30 min |
| 85℃ | 5 min |
2）逆转录温度：推荐使用42℃。对于高GC含量模板或者复杂二级结构的模板，可将逆转录温度提高至50-55℃。
3）85℃加热5 min，目的是使逆转录酶失活。
※ 逆转录产物可立即用于后续PCR或qPCR反应，也可-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。
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