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- Thermo scientific -fermentas
- EP0741
- 2025年11月04日
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| Catalog# | Size, concentration | Supplied with: | Certificate of Analysis | MSDS |
| 5X RT Buffer | ||||
| EP0741 | 2000 u (200 u/µl) | 1.00 ml | EP0741 | |
| EP0742 | 10,000 u (200 u/µl) | 1.00 ml | EP0742 | |
| EP0743 | 4 x 10,000 u (200 u/µl) | 2 x 1.00 ml | EP0743 |
- Features
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- 高通量地制备长达20 kb的全长cDNA。
- 活性温度可高达60°C。
- 热稳定 – 在50°C 的反应物中孵育 60 分钟仍有90%的活性。
- 高效 – 15-30分钟全合成cDNA。
- 高敏感度 – 以宽范围(0.01 pg – 5 μg)的起始RNA量可重复性地合成cDNA。
- 可结合修饰的核苷酸。
- Applications
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- 两步RT-PCR。
- 两步RT-qPCR。
- 第一链 cDNA合成。
- 全长cDNA文库的构建。
- DNA 标记。
- 引物延伸。
Maxima® Reverse Transcriptase能以宽范围(0.01 pg – 5 μg)的初始RNA量在提高的温度下(50-60°C)可重复性地合成cDNA，使之成为两步RT-qPCR的一个理想工具（见图５）。
由于它的高热稳定性（见图1）,这个酶在整个逆转录反应过程中保持全效活性，合成高产量的cDNA，并且能合成长度长达20 kb的很长的 RNA转录片段（见图２）。反应温度也可以提高至60°C 以高效转录带有大量二级结构RNA区域或者采用基因特异性引物提高转录特异性。由于合成速度的提高，逆转录酶的反应能在15到30 分钟完成（见图4）。
酶活性分析混合物：50 mM Tris-HCl (pH 8.3), 4 mM MgCl2 , 10 mM DTT, 50 mM KCl, 0.5 mM dTTP, 0.4 MBq/ml [3 H]-dTTP, 0.4 mM polyA "oligo(dT)12-18 。
50 mM Tris-HCl (pH 7.5), 0.1 M NaCl, 1 mM EDTA, 5 mM DTT, 0.1% (v/v) Triton X-100和50% (v/v)甘油。
- 抑制剂：金属螯合剂、无机磷酸盐、焦磷酸盐和多聚胺。
- 85°C热处理5分钟失活。
在标明的时间点（5-240分钟），酶的活性由标准活性分析确定。
1 µg从Jukat细胞（1和 ）或者从小鼠（3和 4）中提取的总RNA在Maxima® Reverse transcriptase和其他逆转录酶的最佳反应条件时应用。合成的cDNA 在有Long PCR Enzyme Mix （#K0181）和不同基因的特定引物下作为PCR的模板：
1 – 6.8 kb POLE（人聚合酶）
2 – 9.4 kb FBN1（人原纤维蛋白1）
3 – 13.3 kb小鼠 distrophine蛋白
4 – 20.0 kb 小鼠nebuline蛋白
M – GeneRuler™ 1 kb Plus DNA Ladder (#SM1331)
1 µg从Jukat细胞（1和 ）或者从小鼠（3和 4）中提取的总RNA在Maxima® Reverse transcriptase和其他逆转录酶的最佳反应条件时应用。合成的cDNA 在有Long PCR Enzyme Mix （#K0181）和不同基因的特定引物下作为PCR的模板：
1 – 6.8 kb POLE（人聚合酶）
2 – 9.4 kb FBN1（人原纤维蛋白1）
3 – 13.3 kb Dmd (小鼠 distrophine蛋白)
4 – 20.0 kb Neb (小鼠nebuline蛋白)
M – GeneRuler™ 1 kb Plus DNA Ladder (#SM1331)
以1µg 的7kb RNA转录物为模板在15，30和60分钟合成33 P 标记的cDNA。反应产物在1%的碱性琼脂糖中解析。只有Maxima® RT 能够在5分钟内合成7 kb的转录物。
100ng-1pg的总 Jurkat 细胞RNA，oligo(dT)18 和随机六聚体混合物，与Maxima® RT一起用于16个可以重复的反应中。合成的 cDNA在ABI 7500 Real-Time PCR仪上用作后续的的含有Maxima® SYBR Green/ROX qPCR Master Mix (#K0221) 的qPCR 反应的模板。采用Maxima® RT的平行反应显示在宽范围的RNA起始量内呈现可重复的cDNA合成和低变化水平(<1% SD/Cq)。
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文献和实验相关专题 This method was submitted by Jim Hutchins from the University of Mississippi Medical Center. The following is a great RT-PCR protocol developed by Ignacio Rodriguez at the National Eye Institue, NIH. He gets
This method was submitted by Jim Hutchins from the University of Mississippi Medical Center. The following is a great RT-PCR protocol developed by Ignacio Rodriguez at the National Eye Institue, NIH. He gets all the credit
This method was submitted by Jim Hutchins from the University of Mississippi Medical Center. The following is a great RT- PCR protocol developed by Ignacio Rodriguez at the National Eye Institue, NIH. He gets all the credit
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