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第四代耐热逆转录酶(Hifair® IV Reverse T

ranscriptase)
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  • ¥1448
  • 翌圣生物(Yeasen)已认证
  • 11112ES92
  • 上海翌圣
  • 2025年10月16日
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    • 英文名

      Hifair® IV Reverse Transcriptase

    • 保质期

      -20 ºC保存。有效期一年。

    • 供应商

      翌圣生物科技(上海)股份有限公司

    • 保存条件

      -20 ºC

    • 规格

      10000U

    产品信息
    产品名称           产品编号 规格 价格(元)
    Hifair® IV Reverse Transcriptase 第四代耐热逆转录酶 11112ES92 10000 U 1525.00
    Hifair® IV Reverse Transcriptase 第四代耐热逆转录酶 11112ES93 5×10000 U 5425.00

    产品描述
    Hifair® IV Reverse TranscriptaseHieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase基础上通过基因工程技术得到的全新逆转录酶,与Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase相比,其热稳定性大幅度提高,可耐受60℃,适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时,该酶增强了与模板的亲和力,适合低拷贝基因的逆转录和mRNA文库构建。Hifair® IV Reverse Transcriptase合成全长cDNA的能力也有了提升,可扩增长达10 kbcDNA

    产品组分
    产品细节图片1
    编号 组分 产品编号/规格
    11112ES92 (10000 U) 11112ES93 (10000 U)
    11112-A 5×Hifair® IV Buffer 250 μL 1200 μL
    11112-B Hifair® IV Reverse Transcriptase (200 U/μL) 50 μL 250 μL

    产品应用
    全长cDNA文库构建;终点法PCR;实时定量PCR等。

    活性定义
    Poly(A) .Oligo(dT)为模板-引物,在3710 min内,将1 nmoldTTP掺入为酸不溶性物质所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。

    质量控制
    核酸外切酶残留检测:200 U本酶和1 μg λDNA-Hind IV37 ºC下孵育1 hDNA的电泳谱带不发生变化;
    核酸内切酶残留检测:200 U本酶和1 μg Supercoiled pBR322 DNA37 ºC下孵育1 hDNA的电泳谱带不发生变化;
    RNase残留检测:200 U酶和1 μg小鼠肝脏总RNA37 ºC下孵育1 hRNA电泳谱带不发生变化。

    运输与保存方法
    冰袋运输。
    -20 ºC保存。有效期一年。

    注意事项
    1)请保持实验区域洁净;操作时需穿戴干净的手套、口罩;实验所用耗材均需保证RNase free,以防止RNase污染;
    2)所有操作均应在冰上进行,防止发生RNA降解;
    3)为保证逆转录成功,建议使用高质量的RNA样本;
    4)为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

    第一链cDNA合成操作步骤
    1. RNA变性(此步为可选步骤,RNA变性有助于打开二级结构,可在很大程度上提高第一链cDNA的产量。)
    组分 使用量
    RNase free ddH2O to 13 μL
    Oligo (dT)18 (50 μM)
    or Random Primers (50 μM) 
    or Gene Specific Primers(2 μM)
    1 μL
    or 1 μL
    or 1 μL
    模板RNA Total RNA: 10 pg -5 μgmRNA:1 pg-500 ng
    65℃加热5 min,迅速置于冰上冷却2 min。简短离心收集反应液后加入下表中的逆转录反应液,并用移液器轻轻吹打混匀。
    2. 逆转录反应液配制
    组分 使用量
    上一步的反应液 13 μL
    5×Hifair® IV Buffer 4 μL
    dNTP Mix(10 mM) 1 μL
    Hifair® IV Reverse Transcriptase (200 U/μL) 1 μL
    RNase Inhibitor (40 U/µL) 1 μL
    3. 逆转录程序设置
    温度 时间
    25 5 min
    50 15 min
    85 5 min
    【注】:1)当使用Random Primers时,需25℃,孵育5 min;若使用Oligo (dT)18Gene Specific Primers,此步可省略;
    2)逆转录温度:推荐使用50℃。对于GC含量模板或者复杂模板,可将逆转录温度提高到55-60℃;
    385加热5 min,目的是使逆转录酶失活。
    逆转录产物可立即用于后续PCRqPCR反应,也可-20℃短期保存,若需长期保存,建议分装后,于-80℃保存,避免反复冻融。

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             HB200221
     

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