超敏ECL化学发光即用型底物3.0说明书

【培养指南】
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
中文名称：超敏ECL化学发光即用型底物3.0说明书
英文名称：
产品规格：25ml×2/50ml×2
发货周期：1～3天
产品保存4℃避光保存，一年有效。
产品规格
100ml工作液(可用于1000cm2的膜)
溶液A50ml
溶液B50ml
产品说明超敏ECL化学发光试剂盒，是一种基于鲁米诺的增强型化学发光(ECL)HRP底物，发光效果显著优于超敏ECL化学发光，可发出稳定的光信号，适用于通过CCD成像仪检测中等飞克级的蛋白，当底物与优化的抗体浓度和封闭缓冲液配合使用时，可检测到常规ECL底物无法检测的低丰度靶蛋白及最佳发光持续时间。
产品特点
1.用于辣根过氧化物酶(HRP)的化学发光底物
2.使用适当的一抗和二抗时，可在NC膜或PVDF膜上检测丰度为中等飞克级的蛋白条带3.所得信号的可定量检测范围跨越两个数量级
4.通过胶片或成像系统进行曝光，易于捕获图像
5.配方经过优化，可适用于低浓度的抗体检测
7.用于辣根过氧化物酶(HRP)检测的增强型化学发光底物，具有高灵敏度和长信号持续时间8.即刻生成稳定信号，可通过胶片或CCD成像系统方便地实现检测
9.工作液在24小时之内保持稳定；试剂盒可稳定放置长达1年
重要产品信息
好的免疫印迹结果需要优化实验条件，包括样品量，凝胶类型，转移方法，膜类型，封闭剂，洗涤缓冲液，一抗浓度，二抗浓度和孵育时间等。
1.为获得最佳效果，在孵育步骤中使用摇床。
2.不要使用叠化钠作为缓冲液的防腐剂，因为它会抑制HRP。
3.始终戴上手套或使用干净的塑料镊子。金属装置必须没有可见的生锈痕迹，这可能导致斑点和/或高背景。
4.工作液暴露在阳光下或任何其他强光下都可能损害工作液使用效果。
5.由于阻断剂与抗体的交叉反应性引起非特异性信号，所以实验测试对于确定每种蛋白质印迹系统的适当封闭剂是至关重要的。阻止缓冲区也会影响系统的灵敏度。
操作步骤(仅供参考)：
1、贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的  完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
【细胞冻存】
超敏ECL化学发光即用型底物3.0说明书待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
【复苏的原则】
产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类：
第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
Glycogen from oyster糖元二型1克超，
Glycogen from bovine liver糖原九型100毫克超，99%
Glycogen糖元1KU高，
Glycine tert butyl ester hydrochloride盐甘叔酯5克BR，
Glycine methyl ester HCL甘脂盐盐25克BR，
Glycine ethyl ester HC1盐甘酯10克BR，98.5%
Glycine100克AR，99%
Glyceryl triacetate甘油三酯100克CP
Glycerol trioleate甘油三油5克BR，97%
Glycerol tributyrate三甘油酯25克AR，90%
Glycerol phosphate calcium salt甘油钙10毫克CP
Glycerokinase甘油激酶100克BR，5′d(NNN NNN NNN N)3′
Glycerine三25克BR，90%
Glutaric anhydride胶10毫升LR
Glutaric acid1，3-二羧1克PH4，7，9
超敏ECL化学发光即用型底物3.0说明书Cycloserine48T/96T进口、国产1620Cyclandelate检查
Cyclosporine48T/96T进口、国产1620CyclizineHydrochloride含量测定
48T/96T进口、国产1620CyclobenzaprineHydrochloride含量测定
Cyclothiazide(AS)48T/96T进口、国产1620AlphaCyclodextrin含量测定
CyproheptadineHydrochloride48T/96T进口、国产1620BetaCyclodextrinTLC法检查用
48T/96T进口、国产1620GammaCyclodextrin含量测定
Cyromazine48T/96T进口、国产1620Cyclohexylmethanol含量测定
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。