ProteinA/G免疫沉淀磁珠试剂盒规格

实验报告：
一、ProteinA/G免疫沉淀磁珠试剂盒规格分离与培养：
    1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
    2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
    3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
    4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
    5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
    1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%在室温条件下固定细胞15min；
    2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
    3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
    4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
    5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
    6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
中文名称：ProteinA/G免疫沉淀磁珠试剂盒规格
英文名称：Protein A/G Immunoprecipitation Kit
产品规格：20次/100次
发货周期：1～3天
产品简介
ProteinA/GMatrix免疫沉淀磁珠及试剂盒系列产品是利用纳米表面技术使ProteinA/G高密度定向包被到超顺磁性微球表面，与当前国际免疫磁珠市场上同类产品相比，该产品具有更多的抗体结合位点，磁珠使用量更少，非特异性结合率低，可便捷高效地进行免疫沉淀实验。每毫升免疫沉淀磁珠结合HumanIgG的能力可达到300μg以上，单个沉淀反应仅需25μL磁珠即可完成检测。微米级磁珠提供的超大比表面积，大幅缩短抗体与抗原吸附所需的平衡时间，15min内即可完成抗体吸附过程，30min内完成抗原沉淀操作。简短的操作时间避免长时间操作造成目标蛋白水解，保证了目标蛋白的活性及蛋白复合物的完整性。
免疫沉淀磁珠试剂盒配有经过优化预制的缓冲液，为免疫沉淀实验提供了最佳的反应条件，增强了免疫沉淀实验的稳定性。
本产品可广泛应用于细胞裂解物、细胞分泌上清、血清、腹水等样品中抗原的免疫沉淀反应。操作者可以参考本操作说明书，附表1的数据了解不同种属来源及亚型的抗体与ProteinA磁珠、ProteinA/G的结合能力。
储存条件2～8℃保存
保存期1年
注磁珠结合HumanIgG能力(AntibodyCapacity)分别为ProteinA0.4～0.5mg/mL;ProteinA/G0.5～0.6mg/mL
操作流程
1.抗原样品制备本操作说明书提供以下四种样品处理方法，建议您根据不同来源的抗原样品选择适当的方式进行预处理，使待检测抗原释放至样品溶液中。
血清样品处理若目标蛋白丰度较高，建议用结合缓冲液(②)稀释血清样品至目标蛋白终浓度为10～100μg/mL，置于冰上备用(或置于-20℃长期保存)。
悬浮细胞样品处理离心收集细胞(4℃，500g，10min)，弃上清后称重，按每毫克细胞50μL的比例用1×PBS(③)洗涤2次；按每毫克细胞5～10μL的比例加入结合缓冲液(②)，同时加入蛋白酶抑制剂(如终浓度为1mM的PMSF)，混匀后置于冰上处理10min；离心收集上清液(4℃,14000g,10min)，置于冰上备用(或置于-20℃长期保存)。
贴壁细胞样品处理移去培养基，按每1.0×105个细胞150μL的比例用1×PBS(③)洗涤两次；用细胞刮棒刮脱细胞，收集至1.5mLEP管内，按每1.0×105个细胞20～30μL的比例加入结合缓冲液(②)，同时加入蛋白酶抑制剂(如终浓度为1mM的PMSF)，混匀后置于冰上处理10min；离心收集上清液(4℃，14000g，10min)，置于冰上备用(或置于-20℃长期保存)。
大肠杆菌样品处理离心收集大肠杆菌(4℃，12000g，2min)，弃上清后称重，按每克(湿重)菌体10mL的比例用1×PBS(③)洗涤2次；按每克(湿重)菌体5～10mL的比例加入结合缓冲液(②)，同时加入蛋白酶抑制剂(如终浓度为1mM的PMSF)，重悬菌体，超声裂解细胞，离心收集上清(4℃，17000g，10min)。
2.磁珠预处理将免疫沉淀磁珠(①)漩涡振荡1min，使磁珠充分振荡重悬；取25～50μL磁珠悬液置于1.5mLEP管中。加入200μL结合缓冲液(②)洗涤，进行磁性分离［将EP管放置于磁性分离器(⑦)上，使磁珠被吸附在管壁至溶液澄清；该操作描述以下省略］，弃上清液，从磁性分离器上取下EP管，重复洗涤一次。最后加入200μL结合缓冲液(②)重悬磁珠以备用。
3.抗体结合反应
抗体工作液的制备用结合缓冲液(②)稀释抗体样品，配制成终浓度为5～50μg/mL抗体工作液，置于冰上备用。
抗体吸附将步骤2预处理的磁珠悬液进行磁性分离，弃上清液；加入200μL抗体工作液，迅速重悬后在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转EP管，15min后进行磁性分离，收集上清液置于冰上以备后续检测。
洗涤向EP管中加入200μL结合缓冲液(②)洗涤，用移液器轻轻吹打使磁珠-抗体复合物均匀分散，然后进行磁性分离，弃上清液，从磁性分离器上取下EP管。重复以上洗涤操作一次。
4.抗体交联反应(备选)如操作者需要将抗体和目标抗原复合物共同洗脱，请忽略本步骤，进行步骤5。
本步骤适用于操作者需要单独洗脱目标抗原的试验，推荐使用BS3(ThermoScientific，Cat.#21580)作为交联剂，相关实验请参照该试剂的操作说明。
注意事项：
      尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
      如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
      染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
      如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
      荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
      用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
      需自备PBS。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
以下是公司正在热销产品：
Concanamycin A刀豆素A10毫克BR，150-250u/mg
ConA刀豆凝集素A5毫克BR，100-200u/mg
COMT儿茶位转移酶250克BR，200u/g
Compound proteinase复合酶100克BR，97%，二
Complex amino acid复合25克BR，80%
Collagenase骨胶原酶5克BR，2000-5000u/mg
Collagen胶原1公斤BR，300u/mg，末
Colchicine秋水仙素1克USP级，85%，900mcg/mg
Coenzyme Q10醌1克BR，1000u/ul
Coblltous carbonate式钴500克AR，99%
Cobaltous oxalate dihydrate二亚钴25克BR，
Cobaltous acetate tetrahydrate亚钴5克BR，99%
Cobalt(III) oxide高钴500克CP，
Cobalt(II,III) oxide钴100克CP
Cobalt(Ⅱ) Chloride二化钴250毫克准试剂，99.9～100.1%
ProteinA/G免疫沉淀磁珠试剂盒规格CBZ-L-缬PanaxtriolC9orf156  9号染色体开放阅读框156抗体(pIKB Alpha)ELISA Kit  大鼠化核子κB抑制蛋白α大鼠白介1可溶性受体Ⅱ(IL-1sRⅡ)ELISA Kit，48T/96T 进口、国产D-异亮Ciwujianoside-B特价供应P14ARF/CDKN2A  抑癌p16抗体p53 (Rabbit p53/tumor protein) ELISA Kit  兔p53鸡17羟皮质类固醇(17-OHCS)ELISA Kit，48T/96T 进口、国产β-酯盐盐Syringin现货促销MMP9  质蛋白酶9抗体PS ELISA Kit   小鼠脂酰丝17羟皮质类固醇(17-OHCS)ELISA Kit，48T/96T 进口、国产L-酰盐盐Eleutheroside E特价促销TIMP-1(CT)  蛋白酶组织抑制子-1抗体（C端）Nasoniavitripennis vitellogenin,Vtg ELISA Kit  蝶蛹金小蜂卵黄蛋白原小鼠17羟皮质类固醇(17-OHCS)ELISA Kit，48T/96T 进口、国产
培养操作步骤：
1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布； 
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）； 
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时； 
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中； 
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。