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- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
53
- 英文名：
Sucrose phosphoric acid synthetase assay kit
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
详见说明书
英文名称：Sucrose phosphoric acid synthetase assay kit
产品规格：100管/48样|50管/24样
发货周期：1～3天
发货周期：1～3天
检测指标：蔗糖磷酸合成酶;SPS
本试剂盒可测各种植物等样本中蔗糖磷酸合成酶(SPS)活性。蔗糖磷酸合成酶（Sucrose Phosphate Synthase，SPS）主要在绿色光合器官中进行蔗糖合成，在贮藏器官中蔗糖磷酸合成酶活性则很低。但有实验证明，在蔗糖源池的蔗糖流通中，包含着一 个无效的循环，即蔗糖同时合成与分解，此时蔗糖磷酸合成酶活性很强。因此蔗糖磷酸合成酶在库组织中的作用不可低估，在光合与非光合组织中蔗糖磷酸合成酶活 性被代谢产物与可逆的蛋白质磷酸化所调节。
产品优点如下：
1、快速简便：全程约2小时，可测50例左右样本。
2、稳定性好：试剂盒2～8℃存放6个月有效。
6、测试面广：可测动物血清（浆）、组织等。
3、再现性好：变异系数CV=1.7%。
4、回收试验： X =102%。
5、受外界影响因素小：干扰因素少，重复性强。
6、测试面广：可测动物血清（浆）、组织等。
实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
培养操作步骤：
1．蔗糖磷酸合成酶测定试剂盒(紫外比色法)规格用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
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hypoxia-inducible factor 1α表没食子儿茶素
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注意事项：
尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
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为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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