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- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
30
- 英文名：
Calcium Phosphate Cell Transfection Kit
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
>200次
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
中文名称：磷酸钙法细胞转染试剂盒哪家好
英文名称：Calcium Phosphate Cell Transfection Kit
产品规格：>200次
发货周期：1～3天
本试剂盒是在传统的磷酸钙细胞转染方法的基础上进行了改良，提高了转染效率，并降低了毒性。用磷酸钙法转染细胞，不仅可以瞬时表达，也可以筛选稳定株。本试剂盒足够转染不少于200个细胞样品。
试剂盒组分
BBS溶液————————20ml
氯化钙溶液———————20ml
HEK293或HEK293T细胞，即通常所谓的293细胞，是最适合磷酸钙法转染的细胞之一，优化条件后转染效率可以高达90%以上；通常很容易达到40-50%左右的转染效率。大多数常见的细胞例如Hela细胞、CHO细胞等也都适合磷酸钙法转染，但效率比293细胞要略低一些。
本试剂盒不仅适合于大多数贴壁细胞的转染，也适用于一些悬浮细胞的转染。本试剂盒提供的试剂都经无菌处理，可以直接使用。
注意事项
1.转染时，把DNA-氯化钙溶液加入到BBS溶液中，不要把BBS溶液加入到DNA-氯化钙溶液中。
2.高纯度的质粒是获得高转染效率的必要条件，要确保A260/A280大于1.8，并且电泳检测抽提到的质粒90%以上都是超螺旋。
3.在用磷酸钙法转染细胞时应使用浓度不高于5%的二氧化碳，二氧化碳的最佳浓度为3%左右。
4.BBS溶液的pH值直接关系到转染效率，尽量避免把BBS溶液长时间暴露在空气中，以免被空气中的二氧化碳酸化。
5.转染时由于质粒不同、细胞不同，最佳的质粒用量需自行摸索。
储存条件-20℃，有效期12个月。
操作步骤(仅供参考)：
1、贴壁细胞的消化
①吸除培养液，用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution，略盖过细胞即可，室温放置 0.5～2min， 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化；或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来，吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足，则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落， 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000～2000g 离心 1min，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大，通常以消化后可以充分打散组织为宜。
【细胞冻存】
磷酸钙法细胞转染试剂盒哪家好待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
【复苏的原则】
产品名称快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞的种类：
第一种：
是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。
兰索拉唑（Y000077 规格：;20mg
赖诺普利（L0702000 规格：;20mg
赖诺普利 二水合物：用于性能测试（L0702100 规格：;20mg
赖脯胰岛素（Y0000 48 规格：;20mg
来曲唑（Y0000685 规格：;20mg
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来米特（Y0000654 规格：;20mg
辣椒素；诺香草（Y0000670 规格：;20mg
拉米夫定：用于系统适用性试验2（Y0000426 规格：;20mg
拉米夫定：用于系统适用性试验1（Y0000518 规格：;20mg
拉米夫定（Y0000425 规格：;20mg
醌茜17190-250 规格：;20mg
醌茜171901 规格：;20mg
奎宁1718 1 规格：;20mg
磷酸钙法细胞转染试剂盒哪家好 间隙连接蛋白36抗体 LTB ELISA Kit 不耐热肠毒素B亚单位(LTB)ELISA试剂盒
鸭脚树叶;2α,5α-Epoxy-1, 订购|咨询 规格 20mg
12号染色体开放阅读框61抗体 ADMA ELISA Kit 不对称二精(ADMA)ELISA试剂盒
原花青素;Procyanidin 订购|咨询 规格 20mg
12号染色体开放阅读框68抗体 CFHR1 ELISA Kit 补体子H相关蛋白1(CFHR1)ELISA试剂盒
新橙皮苷;Neohesperidin 订购|咨询 规格 20mg
12号染色体开放阅读框63抗体 CFI ELISA Kit 补体子I(CFI)ELISA试剂盒
新补骨脂异黄;Neobavaisofl 订购|咨询 规格 20mg
细胞角蛋白15抗体 CFH ELISA Kit 补体子H(CFH)ELISA试剂盒
甜菊双糖苷;Steviolbioside 订购|咨询 规格 20mg
1号染色体开放阅读框103抗体 CFD ELISA Kit 补体子D(CFD)ELISA试剂盒
松香;Abietic Acid 订购|咨询 规格 20mg
儿茶O移位酶抗体 pre-CFB ELISA Kit 补体子B前体(pre-CFB)ELISA试剂盒
石斛;Dendrobine 订购|咨询 规格 20mg
补体C1qTNF9链多肽抗体 CCP ELISA Kit 补体调节蛋白(CCP)ELISA试剂盒
士;Strychnine 订购|咨询 规格 20mg
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
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