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- 2025年07月12日
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- 库存：
38
- 英文名：
YSRIBIO-C5724
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海研生
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
3ml|6ml|18ml|110ml
实验报告：
一、免疫组化SP法检测试剂盒(兔IgG)规格分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
中文名称：免疫组化SP法检测试剂盒(兔IgG)规格
英文名称：SP Kit(Rabbit)
产品规格：3ml|6ml|18ml|110ml
发货周期：1～3天
本试剂盒适合于一抗为兔IgG的免疫组化实验DAB显色。SP法检测试剂盒是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的，用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质，同亲和素一样，对生物素有极高的亲和力，亲和素是一个碱性蛋白质（PI=10），经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性，对组织和细胞的非特异吸附很低，因此基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。
保存如果长时间不使用，请将所有试剂存放于-20℃，如经常使用，可将封闭液，3%H2O2和20×DAB显色液B存放于2-8℃以方便使用。
操作步骤（以石蜡切片为例）
1．切片常规脱蜡至水(三次二甲，三次乙醇)。
2．3%H2O2室温处理5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
3．可选步聚
a、热修复抗原，将切片浸入0.01M柠檬酸钠缓冲液（PH6.0），电炉或微波炉加热至沸腾后断电，间隔5～10分钟后，反复1～2次。冷却后PBS（pH7.2-7.6）洗涤1～2次。
b、酶消化，滴加消化液，37℃10分钟，PBS（pH7.2-7.4）洗涤2～3次。
c、跳过此步，直接进入下一步。
4．滴加封闭液，室温20分钟。甩去多余液体，免洗。
5．用稀释液将一抗按一定比例稀释（稀释后的一抗4℃可保存一周），也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗37℃孵育1小时左右或20℃2小时左右，也可4℃过夜。PBS（pH7.2-7.4）洗涤3次，每次2分钟。（一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说，阳性染色强度不够时，可提高一抗浓度和延长孵育时间；背景过高时，可降低一抗浓度和缩短孵育时间。）
6．根据用量，用稀释液将生物素-羊抗兔IgG浓缩液按1100稀释成工作液(1ml稀释液加入10μl生物素-羊抗兔IgG浓缩液混匀，此工作液4℃可保存一周)。滴加生物素-羊抗兔IgG工作液，20-37℃孵育30分钟。PBS（pH7.2-7.4）洗涤3次，每次2分钟。
7．根据使用量，用稀释液将链酶亲和素-POD浓缩液按1100稀释成工作液(1ml稀释液加入10μl链酶亲和素-POD浓缩液混匀，此工作液4℃可保存一周)。滴加链酶亲和素-POD工作液，20-37℃，30分钟。PBS（pH7.2-7.4）洗涤4次，每次5分钟。
8．DAB显色根据用量，用PBS（pH7.2-7.4）配制，按1mlPBS加入50μl20×DAB显色液A，加入50μl20×DAB显色液B。充分混匀后滴加到切片上。室温显色，镜下控制反应时间，一般在5-30分钟之间。蒸馏水洗涤终止反应。
9．苏木素轻度复染。脱水，透明，封片。显微镜观察。
对于细胞爬片，固定后，PBS漂洗两次，再用0.5%TritonX-100室温孵育20分钟，PBS漂洗两次，3%H2O2处理15分钟；PBS漂洗两次，接上述第4步。
对于冰冻切片，固定后，PBS漂洗两次，接上述第二步。
注意事项
如果染色背景过高，在SP反应之后，DAB显色之前，用加有0.01-0.02%TWEEN-20的PBST（pH7.2-7.4）洗涤切片4次，PBS洗2次，然后DAB显色。
注意事项：
尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
以下是公司正在热销产品：
AgDDTC砷试剂25克高，
Aerosol OT二辛化二500毫升BR，99%
AEP嗪25毫克BR，
AEC3--N-25克AR，
AEBSF hydrochloride4-(2-)酰盐盐5毫克试剂级，
ADPG腺苷5'-二葡糖二1克高，99%
Adonitol阿东糖100克BR，
AdoMetS-腺甘蛋100克BR，80%
Adipic acid1,6-己二250毫克PH=7
Adenosine腺嘌呤核苷800uBR，60%
Adenine hydrochloride盐5KUUSP级，
Adenine10000UUSP级，
ADA-2NaN-(2-酰)亚二二盐5克AR，99%
ADA腺甙脱酶1克BR，10u/ul
ADAN-(2-酰)-亚二1克络合指示剂
免疫组化SP法检测试剂盒(兔IgG)规格MannitolPARD6B缺陷性分配同源物β抗体ELISAKitforIntercellularAdhesionMolecule5(ICAM5)
ManganeseChloride(AS)PELOPELO蛋白抗体ELISAKitforThromboxaneB2(TXB2)
MannosePOC5细胞中心粒蛋白抗体ELISAKitforKallikrein10(KLK10)
MaprotilineHydrochloridePOLA2DNA聚合酶α2抗体ELISAKitforKallikrein11(KLK11)
MazindolCIVPSF2PSF2蛋白抗体ELISAKitforSignalRecognitionParticle9kDa(SRP9)
MebendazolePTOP肾上腺皮质发育异常同源蛋白抗体ELISAKitforGranulocyteSpecificAnti-NuclearAntibody(GSANA)
MebrofeninRABGAP1Rab蛋白GTP酶激活蛋白1抗体ELISAKitforThyroidHormoneAutoantibody(THAA)
MecamylamineHydrochlorideRCL/cMycresponsivec-Myc应答蛋白抗体ELISAKitforCyclinDependentKinase5(CDK5)
培养操作步骤：
1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
一、免疫组化SP法检测试剂盒(兔IgG)规格分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
中文名称：免疫组化SP法检测试剂盒(兔IgG)规格英文名称：SP Kit(Rabbit)
产品规格：3ml|6ml|18ml|110ml
发货周期：1～3天
本试剂盒适合于一抗为兔IgG的免疫组化实验DAB显色。SP法检测试剂盒是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的，用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质，同亲和素一样，对生物素有极高的亲和力，亲和素是一个碱性蛋白质（PI=10），经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性，对组织和细胞的非特异吸附很低，因此基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。
保存如果长时间不使用，请将所有试剂存放于-20℃，如经常使用，可将封闭液，3%H2O2和20×DAB显色液B存放于2-8℃以方便使用。
操作步骤（以石蜡切片为例）
1．切片常规脱蜡至水(三次二甲，三次乙醇)。
2．3%H2O2室温处理5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
3．可选步聚
a、热修复抗原，将切片浸入0.01M柠檬酸钠缓冲液（PH6.0），电炉或微波炉加热至沸腾后断电，间隔5～10分钟后，反复1～2次。冷却后PBS（pH7.2-7.6）洗涤1～2次。
b、酶消化，滴加消化液，37℃10分钟，PBS（pH7.2-7.4）洗涤2～3次。
c、跳过此步，直接进入下一步。
4．滴加封闭液，室温20分钟。甩去多余液体，免洗。
5．用稀释液将一抗按一定比例稀释（稀释后的一抗4℃可保存一周），也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗37℃孵育1小时左右或20℃2小时左右，也可4℃过夜。PBS（pH7.2-7.4）洗涤3次，每次2分钟。（一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说，阳性染色强度不够时，可提高一抗浓度和延长孵育时间；背景过高时，可降低一抗浓度和缩短孵育时间。）
6．根据用量，用稀释液将生物素-羊抗兔IgG浓缩液按1100稀释成工作液(1ml稀释液加入10μl生物素-羊抗兔IgG浓缩液混匀，此工作液4℃可保存一周)。滴加生物素-羊抗兔IgG工作液，20-37℃孵育30分钟。PBS（pH7.2-7.4）洗涤3次，每次2分钟。
7．根据使用量，用稀释液将链酶亲和素-POD浓缩液按1100稀释成工作液(1ml稀释液加入10μl链酶亲和素-POD浓缩液混匀，此工作液4℃可保存一周)。滴加链酶亲和素-POD工作液，20-37℃，30分钟。PBS（pH7.2-7.4）洗涤4次，每次5分钟。
8．DAB显色根据用量，用PBS（pH7.2-7.4）配制，按1mlPBS加入50μl20×DAB显色液A，加入50μl20×DAB显色液B。充分混匀后滴加到切片上。室温显色，镜下控制反应时间，一般在5-30分钟之间。蒸馏水洗涤终止反应。
9．苏木素轻度复染。脱水，透明，封片。显微镜观察。
对于细胞爬片，固定后，PBS漂洗两次，再用0.5%TritonX-100室温孵育20分钟，PBS漂洗两次，3%H2O2处理15分钟；PBS漂洗两次，接上述第4步。
对于冰冻切片，固定后，PBS漂洗两次，接上述第二步。
注意事项
如果染色背景过高，在SP反应之后，DAB显色之前，用加有0.01-0.02%TWEEN-20的PBST（pH7.2-7.4）洗涤切片4次，PBS洗2次，然后DAB显色。
注意事项：
尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
需自备PBS。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
以下是公司正在热销产品：
AgDDTC砷试剂25克高，
Aerosol OT二辛化二500毫升BR，99%
AEP嗪25毫克BR，
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AEBSF hydrochloride4-(2-)酰盐盐5毫克试剂级，
ADPG腺苷5'-二葡糖二1克高，99%
Adonitol阿东糖100克BR，
AdoMetS-腺甘蛋100克BR，80%
Adipic acid1,6-己二250毫克PH=7
Adenosine腺嘌呤核苷800uBR，60%
Adenine hydrochloride盐5KUUSP级，
Adenine10000UUSP级，
ADA-2NaN-(2-酰)亚二二盐5克AR，99%
ADA腺甙脱酶1克BR，10u/ul
ADAN-(2-酰)-亚二1克络合指示剂
免疫组化SP法检测试剂盒(兔IgG)规格MannitolPARD6B缺陷性分配同源物β抗体ELISAKitforIntercellularAdhesionMolecule5(ICAM5)
ManganeseChloride(AS)PELOPELO蛋白抗体ELISAKitforThromboxaneB2(TXB2)
MannosePOC5细胞中心粒蛋白抗体ELISAKitforKallikrein10(KLK10)
MaprotilineHydrochloridePOLA2DNA聚合酶α2抗体ELISAKitforKallikrein11(KLK11)
MazindolCIVPSF2PSF2蛋白抗体ELISAKitforSignalRecognitionParticle9kDa(SRP9)
MebendazolePTOP肾上腺皮质发育异常同源蛋白抗体ELISAKitforGranulocyteSpecificAnti-NuclearAntibody(GSANA)
MebrofeninRABGAP1Rab蛋白GTP酶激活蛋白1抗体ELISAKitforThyroidHormoneAutoantibody(THAA)
MecamylamineHydrochlorideRCL/cMycresponsivec-Myc应答蛋白抗体ELISAKitforCyclinDependentKinase5(CDK5)
培养操作步骤：
1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
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商品名称 规格 数量 单价 0.5ml离心管 1000支/包 1 180.00 1.5 ml离心管 500支/包 1 100.00 2.0 ml离心管 500支/包 1 110.00 非变性裂解液 100ml 1 160.00 ECL超敏发光液 25ml 1 160.00 WB膜封闭液 50ml 1 40.00 考马斯亮蓝G-250 10g 1 130.00 甘氨酸 500g 1 78.00 丽春红s 10g 1
schoman的回答为：流式细胞仪当然可以检测细胞内蛋白，这一点，并不是很难，当然要比检测细胞表面抗原复杂些，好在都已经有现成的方法，不成问题。不过流式的应用原理主要还是抗原和抗体反应和western、免疫组化没有本质差别，但是由于免疫组化和western都有酶催化底物的放大体系，因此，流式不适合检测低表达的蛋白，低表达的还是采用western（尤其是化学发光底物更佳）和免疫组化更好。当然，流式最大的一个特点就是，可以定量（百分比），如果是高表达的用流式细胞仪非常有优势。流式检测时要求有抗体，可以是直接
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