单核细胞分离

专业承接各类裸鼠、大鼠、小鼠、兔等动物模型建立以及后续检测服务，模型建立包含裸鼠皮下瘤、原位瘤、糖尿病模型、胃炎模型、急性肺损伤、肺纤维化、子宫内膜异位、白癜风、痛风、骨缺损、肝纤维化、关节炎、脓毒症、支气管哮喘、抑郁症、白血病、脑缺血再灌注、骨质疏松、酒精性肝病、学习记忆障碍、胃溃疡、急性心肌缺血、感染性休克、肝硬化等动物实验模型建立，以及后续各项检测。

  在生命科学研究领域内，进行实验研究所需要的基本条件可以总括为：实验动物、设备、信息和试剂。实验动物作为生命科学研究中的基本要素之一，在很多领域的科学研究中，充当着非常重要的安全试验、效果试验、标准试验的角色，尤其在药物有效性和安全性评价中发挥着不可或缺的作用。

  安徽乐奥贝生物技术公司可以独立开展包括大鼠、小鼠、裸鼠、豚鼠、兔等常见实验动物在内的动物造模及相关实验，现已熟练掌握近30余种不同类型动物模型的造模方法。

单核细胞分离
在外周血中，要分离到足够数量的单核细胞，通常不用比重为1.077的细胞分层液，因为单核细胞的比重与淋巴细胞近似，且含量仅为3%-8%，故很难将两者分开。而如用黏附法，则黏附细胞的剥离较难控制，剥离过度易造成细胞损伤，剥离不全使细胞回收率下降。以下介绍的两种方法可获得量多且纯度和活力都较好的单核细胞。（一）Colotta方法【实验原理】见Percoll非连续密度梯度分离法。【主要试剂与器材】（1）人外周血分离的PBMC悬液。（2）HBSS(无Ca2+、Mg2+)，含10%FCS和25mmol/LHEPES的RPMI-1640(pH7.2)。（3）46%浓度的Percoll。【操作步骤】（1）将分离获得的PBMC用HBSS洗涤2次（1000rpm，5min），加5ml完全培养液重悬。（2）将细胞悬液缓慢叠加在5ml的46%Percoll上，室温离心（2200rpm，20min或400g，25min）；得到3个带：第一带为富集的单核细胞（83%）；第二带含少量的单核细胞；第三带则为淋巴细胞。（3）收集第一、第二带的细胞，经洗涤后，重悬于培养液中。【注意事项】将细胞悬液叠加在Percoll分离液上时，应缓缓加入，保证二者间的比重界间不被破坏，否则影响分离效果。（二）密度梯度离心法【主要试剂与器材】（1）肝素抗凝血。（2）不同比重的聚蔗糖-泛影葡胺细胞分层液：A液：90g/L聚蔗糖15ml，加500g/L泛影葡胺10ml(比重为1.14)。B液：90g/L聚蔗糖17.5ml，加500g/L泛影葡胺10ml(比重为1.13)。C液：90g/L聚蔗糖20ml，加500g/L泛影葡胺10ml(比重为1.12)。D液：90g/L聚蔗糖24ml，加500g/L泛影葡胺10ml(比重为1.08)。【操作步骤】（1）在15ml离心管内依次加入A液、B液、C液和D液各2ml，制成梯度。（2）在D液上叠加肝素抗凝血（用HBSS稀释）约2ml，室温下，离心（1000rpm，40min）；血浆与D液的交界面即为单核细胞层（纯度可达97%）。（3）用吸管小心吸取该细胞层，经洗涤后，重悬于培养液中备用。