免疫荧光单标

免疫荧光单标检测

免疫荧光实验步骤 脱蜡至水 二甲苯Ⅰ(8min) 二甲苯Ⅱ(8min) 无水乙醇和二甲苯1:1(5min) 无水乙醇(3min) 95%乙醇(3min) 85%乙醇(3min) 75%乙醇(3min) PBS洗3遍 二．抗原修复 柠檬酸钠抗原修复液修复。 抗原修复100℃  20min  ;自然冷却至室温。 三．PBST洗2遍，PBS洗1遍。每次5min。 四．用30%H2O2和甲醇配制3%的H2O2溶液。每张切片加1滴，室温下孵育10分钟，以阻断内源性过氧

免疫荧光单标记和双标记的方法

免疫荧光单标记和双标记的方法 1免疫荧光单标记方法 免疫 荧光单标记是指只标记一种蛋白质分子，方法比较简单，只要按照染色步骤去做，通常不存在太多的问题。但要注意固定液的选择，固定液选择的合适与否，可能会直接影响染色结果。具体染色方法如下。 1)所需材料与试剂 (1)培养在盖玻片或玻璃培养皿中融合程度达到60％一70％的细胞。 (2)一抗、FITC或TRITC标记的二抗。 (3)4％多聚甲醛固定液或冷

免疫荧光实验指南

固定和透化 在培养板中将已爬好细胞的盖玻片用 1 × PBS 浸洗 3 次，每次 3 min。 用 4% 的多聚甲醛固定爬片 15 min，1 × PBS 浸洗玻片 3次，每次 3 min。 0.5%Triton X-100(1× PBS 配制 )室温通透细胞 15 min（细胞膜上表达的抗原省略此步骤）, 1 × PBS 浸洗玻片 3 次，每次 3 min。 封闭 吸水纸吸干 1 ×PBS，在玻片上滴加 5% 的正常血清（与二抗种属来源一致或相似），室温封闭 1 h