密度分离法分离单核细胞
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单核细胞只占末梢血白细胞的3%～5%，比重与淋巴细胞近似，用离心的方法很难将二者分开。而利用贴壁法也很难将两者分开，且有损伤细胞及回收率低等缺点。现可用以下两种方法获得量较多且纯度较高的单核细胞。
1.Colotta方法
[试剂及配制]
(1)pH 7.2 PBS液
(2)聚蔗糖-泛影葡胺分层液(D=1.077)
(3)10%小牛血清，25mmol/L HEPES RPMI-1640培养液(pH7.2)
(4)46% Percoll液。
[操作方法]
(1)将用PBS稀释5倍的肝素抗凝血40ml，叠加在10ml分层液上，室温离心，2000r/min 20min；
(2)吸出外周血单个核细胞层，用PBS离心洗2次，再用PBS悬浮；
(3)底速离心500r/min ，10min，除去血小板，于沉淀中加入10%小牛血清，25mol/L HEPES RPMI-1640培养液，配成5ml的悬液；
(4)将其叠加在5ml 46%的Percoll液之上，室温离心2000r/min， 30min后，得到3个带：第1带为富含单核细胞层(83%)；第2带也有少量的单核细胞；第3带为淋巴细胞；
(5)收集第1、2带细胞。
2．密度梯度离心法
[试剂及配制]
A液：90g/L聚蔗糖15ml,加500g/L泛影葡胺10ml(比重1.14)
B液：90g/L聚蔗糖17.5ml,加500g/L泛影葡胺10ml(比重1.13)
C液：90g/L聚蔗糖20ml,加500g/L泛影葡胺10ml(比重1.12)
D液：90g/L聚蔗糖24ml,加500g/L泛影葡胺10ml(比重1.08)
[操作方法]
(1)在10ml离心管中依次加入A、B、C、D 4液各2ml，制成密度梯度；
(2)于D液上重叠以生理盐水2倍稀释的肝素抗凝血2ml，1000r/min 离心40min。在血浆与D液的界面为单核细胞(其纯度为97%～100%)；
(3)吸出单核细胞层。
