Transwell侵袭实验

专业承接各类裸鼠、大鼠、小鼠、兔等动物模型建立以及后续检测服务，模型建立包含裸鼠皮下瘤、原位瘤、糖尿病模型、胃炎模型、急性肺损伤、肺纤维化、子宫内膜异位、白癜风、痛风、骨缺损、肝纤维化、关节炎、脓毒症、支气管哮喘、抑郁症、白血病、脑缺血再灌注、骨质疏松、酒精性肝病、学习记忆障碍、胃溃疡、急性心肌缺血、感染性休克、肝硬化等动物实验模型建立，以及后续各项检测。

  在生命科学研究领域内，进行实验研究所需要的基本条件可以总括为：实验动物、设备、信息和试剂。实验动物作为生命科学研究中的基本要素之一，在很多领域的科学研究中，充当着非常重要的安全试验、效果试验、标准试验的角色，尤其在药物有效性和安全性评价中发挥着不可或缺的作用。 安徽乐奥贝生物技术公司可以独立开展包括大鼠、小鼠、裸鼠、豚鼠、兔等常见实验动物在内的动物造模及相关实验，现已熟练掌握近30余种不同类型动物模型的造模方法。

1. 实验原理
   • Transwell 侵袭实验主要用于研究细胞的侵袭能力，其原理是模拟体内细胞外基质和基底膜的屏障作用。Transwell 小室是一个带有微孔膜（一般孔径为 8μm）的装置，微孔膜将小室分为上下两个部分。在下室中加入含有趋化因子（如血清）的培养基，上室接种细胞。对于具有侵袭能力的细胞，它们能够分泌蛋白酶来降解微孔膜上预先包被的细胞外基质（如 Matrigel）成分，然后穿过微孔膜进入下室，通过计数进入下室的细胞数量可以评估细胞的侵袭能力。
2. 实验准备
   • 细胞培养与准备
     • 选择合适的细胞系，例如在肿瘤研究中，若要研究肿瘤细胞的侵袭能力，可选用具有高侵袭性的细胞系如 MDA - MB - 231（人乳腺癌细胞）或 A549（人肺癌细胞）等。细胞需要在适宜的培养基（如含 10% 胎牛血清的 DMEM 培养基）中，在 37℃、5% CO₂条件下培养至对数生长期，然后用胰蛋白酶消化制成单细胞悬液，细胞计数后调整细胞浓度至合适范围，一般为 1×10⁵ - 1×10⁶个 /mL。
   • Transwell 小室及试剂准备
     • Transwell 小室：购买合适规格的 Transwell 小室，一般常用的是 24 - 孔或 12 - 孔的 Transwell 小室。使用前需要对小室进行预处理，如将小室放入培养箱中用无菌的 PBS 浸泡一段时间，使其达到平衡状态。
     • 细胞外基质（Matrigel）：Matrigel 是从 Engelbreth - Holm - Swarm (EHS) 小鼠肉瘤中提取的一种细胞外基质成分，主要成分包括层粘连蛋白、胶原蛋白等，它能够模拟体内的基底膜。Matrigel 需要在冰上解冻，用无血清培养基进行稀释，一般稀释比例为 1:3 - 1:8 左右，然后取适量稀释后的 Matrigel 均匀地涂覆在 Transwell 小室的微孔膜上，在 37℃下孵育一段时间（约 30 - 60 分钟）使其凝固。
     • 培养基：准备上下室所需的培养基。下室培养基一般含有较高浓度的趋化因子，如含 10% - 20% 胎牛血清的培养基，用于吸引细胞向下室迁移；上室培养基一般为无血清培养基，以避免血清中的成分干扰细胞侵袭的过程。
3. 实验步骤
   • 细胞接种与培养
     • 将适量的细胞悬液（一般为 100 - 200μL）加入到已经包被好 Matrigel 的 Transwell 小室的上室中，注意避免产生气泡。然后将小室放入 24 - 孔板或 12 - 孔板中，在下室中加入适量的含有趋化因子的培养基（一般为 600 - 800μL）。将培养板放入 37℃、5% CO₂培养箱中培养一段时间，培养时间根据细胞类型和实验目的而定，一般为 24 - 72 小时。
   • 细胞固定与染色
     • 培养结束后，取出 Transwell 小室，用棉签轻轻擦去上室一侧微孔膜表面未侵袭的细胞。然后将小室放入预先准备好的甲醇或溶液中进行固定，固定时间一般为 10 - 15 分钟。固定后，用结晶紫或hematoxylin - 伊红（HE）等染色剂对微孔膜下室一侧的细胞进行染色，染色时间根据染色剂的说明书进行，如结晶紫染色一般为 10 - 15 分钟。染色后，用蒸馏水或 PBS 轻轻冲洗微孔膜，以去除多余的染色剂。
   • 细胞计数与结果分析
     • 将染色后的 Transwell 小室放在显微镜下观察，可以选择合适的视野（如 10× 或 20× 物镜），对穿过微孔膜进入下室的细胞进行计数。为了减少误差，可以在每个小室中选取多个视野进行计数，然后计算平均值。通过比较不同处理组（如不同药物处理、基因敲除或过表达等）细胞的侵袭数量，来评估细胞侵袭能力的变化。可以将数据以柱状图或散点图等形式进行展示，并且进行统计学分析（如 t - 检验或方差分析）来判断差异是否具有统计学意义。
4. 实验注意事项
   • Matrigel 在操作过程中需要一直放在冰上，因为它在室温下容易凝固，影响涂覆效果。
   • 接种细胞时要注意细胞悬液的均匀分布，避免细胞聚集在小室的一侧，影响实验结果的准确性。
   • 在擦去上室未侵袭细胞时，动作要轻柔，避免损伤微孔膜，影响对下室细胞的观察和计数。