shRNA干扰载体构建(稳定细胞株构建)

稳定细胞株构建

 

研究某个基因的功能最常用的手段是在宿主细胞中过量表达或者通过RNA干扰的方法knock-down该基因，常规手段有瞬时转染和筛选稳定细胞系。

筛选出该基因的过表达或者RNA干扰的稳定细胞系会给您的实验带来极大的便利。有了稳定细胞系，后期的Co-IP或者Pull-Down实验会非常便利；稳定表达重组荧光蛋白的细胞系可以让您动态地观察分子在细胞中的运动。构建稳定细胞系的基本原理是将外源DNA克隆到具有某种抗性的载体上，载体被转染到宿主细胞并整合到宿主染色体中，用载体中所含的抗性标志进行筛选。最常用的真核表达载体的抗性筛选标志物有新霉素（neomycin）、潮霉素（hygromycin）和嘌呤霉素(puromycin)，常用G418来代替新霉素进行选择性筛选，筛选得到可稳定表达目的蛋白，或者稳定表达沉默特定基因的细胞株。

我们的优势：
种子优良：低代数细胞来源，无支原体无黑胶虫
性状稳定：严酷的筛选及靶基因表达验证体系
活力无损;严格的建系后连续3代细胞增殖活力评价

筛选稳定细胞系的方法：
 

1、转染质粒后，单克隆方法筛选稳定细胞系

2、慢病毒感染筛选稳定细胞系

慢病毒感染方法较质粒转染筛选单克隆方法更方便和高效，是目前主流的稳定细胞系筛选方法。慢病毒几乎可以感染所有种类的细胞，并且在感染后可以整合到受感染细胞的基因组，进行长时间的稳定表达，因此，慢病毒常用于制备稳定表达/沉默特定基因的单克隆细胞株circRNA /LncRNA过表达和干扰慢病毒。

汉恒生物构建包装的带puromycin抗性的慢病毒，在感染目的细胞后，可通过加入puromycin进行选择性筛选，从而获得稳定表达shRNA或者特定基因的细胞株。我们提供病毒包装服务（您可以自己完成稳态细胞筛选），或者一站式的稳定细胞系的筛选服务

服务流程：