- ￥800
- 上海.上海
- 2026年01月21日
企业认证
相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 服务名称：
慢病毒(Lentivirus)介导的siRNA活体实验用病毒转染服务
- 规格：
P4240-100UG
技术服务详细描述
Lentivirus 载体的技术特点 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
本公司使用的慢病毒表达系统，它由三部分组成：
- 慢病毒表达载体
- 慢病毒包装质粒
- 可产生假病毒颗粒的细胞系
慢病毒表达载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装RNA到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。为产生高滴度的病毒颗粒，需要利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞，在细胞中进行病毒的包装，包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中，离心取得上清液后，可以直接用于宿主细胞的感染，目的基因进入到宿主细胞之后，经过反转录，整合到基因组，从而高水平的表达效应分子。
服务流程
对于活体 RNAi实验模型，吉玛公司可以为您生产高质量的病毒液，服务流程如下：
- 根据目的基因相关信息（序列，序列号等），利用高效的设计软件，设计 siRNA序列，针对每条目的基因，我们设计3条siRNA序列，其中1条序列为阴性对照组；
- 根据设计好的 siRNA序列，设计，合成两条互补的短片段的DNA；
- 对合成好的 DNA片段进行稀释，退火，连接到线形化处理过的载体，转化，涂平板，过夜培养；
- 通过 PCR的方法筛选阳性菌落，进行测序，分析测序结果；
- 对于测序正确的重组质粒，提取和纯化高质量的不含内毒素的 siRNA病毒穿梭质粒；
- 利用构建好的质粒做转染实验， 48小时后通过实时荧光定量和Western的方法分析目的基因，筛选出一条最有效的siRNA序列；
- 筛选出的高效重组载体和病毒包装质粒共转染 293T细胞，进行病毒包装和生产，收集病毒液；
- 浓缩、纯化病毒液，测定滴度；
提供高质量的病毒液给客户（对于活体实验，我们提供的病毒基本单位为 1×108 ifu ，这个单位为一只小鼠一次实验的平均用量）
基于慢病毒系统的 RNAi沉默效果
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
- 作者
- 内容
- 询问日期
文献和实验1.慢病毒载体概述 慢病毒载体（Lentivirus）是一类改造自人免疫缺陷病毒（HIV）的病毒载体，是逆转录病毒的一种，基因组是RNA，其毒性基因已经被剔除并被外源性目的基因所取代，属于假型病毒。可利用逆转录酶将外源基因整合到基因组中实现稳定表达，具有感染分裂期与非分裂期细胞的特性。 慢病毒基因组进入细胞后，在细胞浆中反转录为DNA，形成DNA整合前复合体，进入细胞核后，DNA整合到细胞基因组中。整合后的DNA转录成mRNA，回到细胞浆中，表达目的蛋白；或产生小RNA。慢病毒介导的基因
【原创】lentivirus calcium phosphate transfection protocl
的ph值非常重要，需要严格控制，解冻后的HBS 不可再用。 3.一般package plasmid 有一个是vsvg，可能有益于慢病毒的稳定性，目前还在测试中。 4.一般sh等小序列直接用medium都可以，效力也比较高，超过2Kbp的最好纯化一下，至少高速离心一下。 5.试过用DNA-LIPOFECTAMINIE 2000 转染，效果确实比calcium好很多，当然，价格也高了很多，经费足的，可以选用。
最近开始自己包装慢病毒shRNA，用的是之前组里师姐的protocol，基本上是基于TRONO LAB的protocol。之前师姐包装的病毒，效率很高，基本上能KD八成到九成。最近我自 己包装了两次，浓缩后根据之前师姐包装的病毒用量感染肝癌细胞，细胞生长速度明显 延缓，形态改变也跟之前的相似。但是做western却只能看到很marginal的蛋白水平降 低，在有的细胞株甚至完全看不到KD。我用GFP质粒转染HEK293FT，效率很高，24小时 至少看到90%的细胞有GFP表达
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
