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腺相关病毒载体/AAV包装服务/AAV

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和元生物技术(上海)股份有限公司
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产品详情

简介: 根据客户提供的基因信息,从生物信息学网站上调出该基因的cDNA序列,将cDNA序列构建到腺相关病毒载体上,生产的病毒颗粒可以直接用于感染细胞或者动物实验
提供商: 和元上海
服务名称: 腺相关病毒载体/AAV包装服务/AAV
地区: 上海
规格: 1.0E+12~1.0E+13 v.g./ml

腺相关病毒载体/AAV包装服务/AAV

 

腺相关病毒(Adeno-associated Virus,AAV)是一类细小病毒,基因组为单链DNA,对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。重组腺相关病毒(rAAV)改造自细小病毒腺相关病毒(AAV)。rAAV是一种单链DNA病毒,具有广泛的宿主范围以及细胞和组织感染能力,并且以伴随体(episome)状态存在于细胞内,进行不依赖于宿主细胞活性的基因表达。rAAV载体系统不包含任何野生型病毒产物,宿主细胞免疫反应被降至最低。

rAAV因其颗粒小,扩散能力强,低免疫原性,在基因治疗和基因功能研究中有着广泛的应用。主要包括神经系统定位注射,眼内注射和整体注射(肝脏、心脏及肺等器官)等。

AAV通常用于体内实验研究,可以进行肌肉注射、静脉注射或腹腔注射,涵盖神经系统、心脏、肝脏、肌肉、脂肪、肺部等,尤其在神经系统中应用最为广泛。不同的注射部位可以选择相应的启动子实现。

AAV相关应用:

光遗传     化学遗传     神经环路示踪    钙离子成像     CRISPR/Cas9     Cre-LoxP     RNA干扰     基因过表达     microRNA表达    microRNA抑制

服务简介:

根据客户提供的基因信息,从生物信息学网站上调出该基因的cDNA序列,将cDNA序列构建到腺相关病毒(AAV)载体上,生产的病毒颗粒可以直接用于感染细胞或者动物实验。

和元上海提供的腺相关病毒具有感染温和,免疫原性小,长效稳定表达的特点。AAV的主要应用方向在于定位注射和整体注射实验。不同血清型的AAV组织感染嗜亲性各不相同,表现出一定的器官靶向特异性,可以参考如下血清型选择的表格。

服务流程:

服务流程

腺相关病毒与其他几种常用病毒载体相比,具有感染温和,免疫原性小,长效稳定表达的特点。AAV的主要应用方向在于定位注射和整体注射实验。

重组腺相关病毒rAAV是利用AAV2型基因组与不同的衣壳蛋白结合产生的混合体病毒载体,一般标记为rAAV2/N (N为不同的衣壳血清型)。重组的病毒具有AAV2型的稳定表达和基因整合能力,同时获得了不同血清型的细胞感染特异性。

血清型选择:

根据衣壳蛋白的蛋白结构和所结合的细胞外受体分子不同,可以分为多种血清型。不同血清型的AAV组织感染嗜亲性各不相同,表现出一定的器官靶向特异性。

 
血清型及适用组织
血清型 适用组织
AAV1 肌肉,心脏,神经
AAV2 体外,神经
AAV5 肺,眼睛,神经
AAV6 肺,心脏
AAV7 肌肉,肝脏
AAV8 肝脏,肌肉,眼睛
AAV9 肺,肝脏,肌肉,心脏
rh10 肋膜,神经
 
可供选择的载体(仅列举部分载体)
载体名称 包装容量 载体启动子
pAAV-CAG-MCS-3FLAG 1.5kb 广泛表达的强启动子
pAAV-CAG-MCS-EGFP-3FLAG 0.8kb 广泛表达的强启动子
pAAV-CAG-EGFP-2A-MCS-3FLAG 0.8kb 广泛表达的强启动子
pAAV-CaMKIIa-MCS-3FLAG 2.2kb 椎体神经元特异性启动子,高丰度表达
pAAV-CaMKIIa-MCS-EGFP-3FLAG 1.5kb 椎体神经元特异性启动子,高丰度表达
pAAV-CaMKIIa-EGFP-2A-MCS-3FLAG 1.5kb 椎体神经元特异性启动子,高丰度表达
pAAV-CMV-MCS-3FLAG 2.7kb 广泛表达的强启动子
pAAV-CMV-MCS-EGFP-3FLAG 2kb 广泛表达的强启动子
pAAV-CMV-EGFP-2A-MCS-3FLAG 2kb 广泛表达的强启动子
pAAV-CMV-bGlobin-MCS-3FLAG 2.2kb 广泛表达的强启动子
pAAV-CMV-bGlobin-MCS-EGFP-3FLAG 1.5kb 广泛表达的强启动子
pAAV-CMV-bGlobin-EGFP-2A-MCS-3FLAG 1.5kb 广泛表达的强启动子
pAAV-EF1a-MCS-3FLAG 2.3kb 广泛表达的启动子,中丰度表达
pAAV-EF1a -MCS-EGFP-3FLAG 1.6kb 广泛表达的启动子,中丰度表达
pAAV-EF1a-EGFP-2A-MCS-3FLAG 1.6kb 广泛表达的启动子,中丰度表达
pAAV-Syn-MCS-3FLAG 2.7kb 成熟神经元特异性启动子,中丰度表达
pAAV-Syn-MCS-EGFP-3FLAG 2kb 成熟神经元特异性启动子,中丰度表达
pAAV-Syn-EGFP-2A-MCS-3FLAG 2kb 成熟神经元特异性启动子,中丰度表达
pAAV-GFAP-MCS-EGFP-3FLAG 0.3kb 星形胶质细胞特异性启动子,中丰度表达
备注:上述载体中EGFP标记可以换为mcherry标记,带有mcherry标记的载体已有。

附录:

客户使用和元AAV发表的部分高分文章列表

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Science.  (IF=31.027).Ding Liu,et.al.(2014). Medial prefrontal activity during delay period contributes to learning of a working memory task. [腺相关病毒光敏感,神经系统,前额叶]
Nature medicine. (IF=22.864).Li-Juan Zhu,et.al.(2014).CAPON-nNOS coupling can serve as a target for developing new anxiolytics. [腺相关病毒产品,体内注射,过表达]
The International Journal of Neuropsychopharmacology. (IF=5.641).Yingxin Wang,et.al.(2014).Protein kinase Mζ is involved in the modulatory effect of fluoxetine on hippocampal neurogenesis in vitro. [腺相关病毒,定位注射海马]
Cell. (IF=32.242).Wenjie Bian,et.al.(2015).Coordinated Spine Pruning and Maturation Mediated by Inter-Spine Competition for Cadherin/Catenin Complexes. [腺相关病毒,神经]
Nature Neuroscience. (IF=16.095).Hongbin Yang,et.al.(2015).Laterodorsal tegmentum interneuron subtypes oppositely regulate olfactory cue-induced innate fear. [腺相关病毒,光遗传]
Nature Communications.  (IF=11.47).Pengfei Wei,et.al.(2015).Processing of visually evoked innate fear by a non-canonical thalamic pathway. [腺相关病毒,下丘脑]
Nature Communications. (IF=11.47).Yingjie Zhu,et.al.(2015).Control of response reliability by parvalbumin-expressing interneurons in visual cortex. [腺相关病毒,视觉皮质]
ELife.  (IF=9.322).Ming Chen,et.al.(2015).Morphine disinhibits glutamatergic input to VTA dopamine neurons and promotes dopamine neuron excitation. [腺相关病毒,腹侧被盖区,神经系统]
The Journal of Neuroscience. (IF=6.344).Yueguang Liu,et.al.(2015).Ascl1 Converts Dorsal Midbrain Astrocytes into Functional Neurons In Vivo. [腺相关病毒,神经方向]
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病毒相关技术服务:

病毒包装服务     腺相关病毒包装     慢病毒包装    腺病毒包装     逆转录病毒包装

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腺相关病毒载体/AAV包装服务/AAV  腺相关病毒(Adeno-associated Virus,AAV)是一类细小病毒,基因组为单链DNA,对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。重组腺相关病毒(rAAV)改造自细小病毒腺相关病毒(AAV)。rAAV是一种单链DNA病毒,具有广泛的宿主范围以及细胞和组织感染能力,并且以伴随体(episome)状态存在于细胞内,进行不依赖于宿主细胞活性的基因表达。rAAV载体系统不包含任何野生型病毒产物,宿主细胞免疫反应被降至最低。rAAV因其颗粒小,扩散能力强,低免疫原性,在基因治疗和基因功能研究中有着广泛的应用。主要包括神经系统定位注射,眼内注射和整体注射(肝脏、心脏及肺等器官)等。AAV通常用于体内实验研究,可以进行肌肉注射、静脉注射或腹腔注射,涵盖神经系统、心脏、肝脏、肌肉、脂肪、肺部等,尤其在神经系统中应用最为广泛。不同的注射部位可以选择相应的启动子实现。AAV相关应用:光遗传     化学遗传     神经环路示踪    钙离子成像     CRISPR/Cas9     Cre-LoxP     RNA干扰     基因过表达     microRNA表达    microRNA抑制服务简介:根据客户提供的基因信息,从生物信息学网站上调出该基因的cDNA序列,将cDNA序列构建到腺相关病毒(AAV)载体上,生产的病毒颗粒可以直接用于感染细胞或者动物实验。和元上海提供的腺相关病毒具有感染温和,免疫原性小,长效稳定表达的特点。AAV的主要应用方向在于定位注射和整体注射实验。不同血清型的AAV组织感染嗜亲性各不相同,表现出一定的器官靶向特异性,可以参考如下血清型选择的表格。服务流程:腺相关病毒与其他几种常用病毒载体相比,具有感染温和,免疫原性小,长效稳定表达的特点。AAV的主要应用方向在于定位注射和整体注射实验。重组腺相关病毒rAAV是利用AAV2型基因组与不同的衣壳蛋白结合产生的混合体病毒载体,一般标记为rAAV2/N (N为不同的衣壳血清型)。重组的病毒具有AAV2型的稳定表达和基因整合能力,同时获得了不同血清型的细胞感染特异性。血清型选择:根据衣壳蛋白的蛋白结构和所结合的细胞外受体分子不同,可以分为多种血清型。不同血清型的AAV组织感染嗜亲性各不相同,表现出一
 重组腺相关病毒(Recombinant adeno-associated virus,rAAV)是利用AAV2基因组DNA和不同血清型AAV衣壳蛋白包装成的病毒载体,一般标记为AAV2/N(N指衣壳血清型),有时仅标注血清型,如AAV9即AAV2/9。AAV因为免疫原性低,目前没有发现致病报道,并且表达持续时间较长,在实验室被普遍采用。现在对实验要求较高的科研工作者很多会推荐选用AAV载体。在AAV的各种血清型中,AAV9是目前公认的高效特异性靶向心脏表达的病毒载体血清型(图1)。图1 不同血清型AAV感染小鼠心脏组织。cTnT-EGFP包装进AAV衣壳血清型2,1,6,8,9后分别通过颈静脉注射1周龄小鼠,4周后检测小鼠心脏组织EGFP荧光 (Gene Therapy. January,2011)   AAV9经过系统注射(经血液循环)途径,优先感染心脏、肺的平滑肌、骨骼肌及其他脏器的平滑肌,也会瞬时感染肝脏,但在肝脏中的表达不持久。如果将AAV9递送到新生鼠中,病毒能够穿过血脑屏障,实现在大脑的中枢神经系统中高效表达(图2)。<和元生物可为您提供多种pAAV-EGFP病毒载体>图2 AAV9-EGFP注射新生小鼠P4,1个月后冰冻切片检测各组织EGFP荧光(Cell Research. August,2016)一、AAV注射方式介绍  AAV的注射方式,不同的文章中采用了不一样的注射方式。总体上,一般包括静脉注射、心腔内注射、心肌内定点注射、心包内注射(介于心肌与心包膜之间),其中静脉注射包括尾静脉注射、颈静脉注射、面部静脉注射等(图3)。  尾静脉注射和心腔内注射由于病毒流进血液循环,分布较均匀。心腔内注射需要结合主动脉嵌夹进行,由于开胸腔手术需要辅助呼吸,对手术操作要求较高。心肌内定点注射时每点注射2-5ul,效果是在注射的局部点附近表达较高,但扩散非常有限。总的来说,很多实验直接用尾静脉注射即可,但是可能需要较高剂量的病毒,如果用心肌内定点注射,即小量多点注射,可以达到很好的感染表达效果,但是后者操作技术难度略高,也需要花费更长的操作时间。  结合新生鼠(出生2-10天)注射效果比较来看,新生鼠注射表达效果大大优于成年鼠,消耗病毒剂量也相对较低。新生鼠的注射,一般根据实验室的条件来看,可以选择颈静脉注射、面部静脉注射和心
腺相关病毒AAV 腺相关病毒(AAV)是一种人细小病毒,目前因为能作为一种基因治疗载体而受到广泛关注。构建重组AAV(rAAV)涉及到用一个目的基因替换病毒基因组的大部分,然后将这个重组基因组包装到一个有感染性的病毒颗粒里。目前大多数生成rAAV的实验方案需要共转染一个载体质粒和一个表达病毒复制和结构基因的包装质粒到腺病毒(Ad)感染的培养细胞中。此方法的局限性包括(1) Ad辅助病毒污染rAAV,(2)rAAV的低产出,(3)生成有复制能力的AAV。在此我们描述了新的辅助质粒(pH3和pH5),排除了Ad共转染的需求。辅助质粒表达AAV的rep和cap基因和Ad E2A、VAI和E4基因。当辅助质粒在没有Ad感染的情况下共转染到人293细胞中,rAAV载体产量超过了pAAV/Ad包装质粒的80倍。另外,有复制能力的AAV在rAAV制备过程中少于0.00125%。此系统的主要优点是(1)无需感染性的腺病毒(2)只使用两个质粒就提高了转染效率和载体的产出。我们相信该双质粒转染系统因其简便性和高产出而使AAV载体系统能被更广泛地使用。该系统尤其将对多rAAV载体的临床前分析有用。   一、腺相关病毒(AAV)载体 二、腺相关病毒(AAV)干扰载体 ●广泛用于体内实验研究(定点注射与整体注射) ●广泛用于体内实验研究(定点注射与整体注射) ●表达稳定高效;非整合,转基因安全性高 ●表达稳定高效;非整合,转基因安全性高 ●CMV, EF1a, CAG,GBG, Syn 等启动子可选 ●构建快捷,序列保证准确 ●EGFP、mCherry等荧光蛋白可选 ●标记基因可采用EF1a或GBG启动子表达,稳定高效   三、腺相关病毒包装与纯化   ●腺相关病毒包装采用三质粒系统进行包装,共转染后通过对细胞裂解物进行密度梯度离心纯化和收集病毒。       四、腺相关病毒滴度检测 五、腺相关病毒感染细胞 ●检测方法:定量PCR检测病毒基因组中的外源DNA拷贝数 ●
腺相关病毒 (adeno-associated virus, AAV) 是一类微小、无被膜、复制缺陷型病毒。在辅助病毒诸如腺病毒条件下,AAV 能复制产生子代病毒颗粒。在缺少辅助病毒情况下,腺相关病毒能整合其基因组到 19 号染色体一个特别位点并保持整合,直到随后的辅助病毒将其从潜伏状态下拯救出来。重组 AAV(rAAV) 载体是将自然 AAV 基因组中的 rep 和 cap 基因剔除,并将我们需要的基因插入 TR 元件之间,与辅助质粒共转培养的细胞。从而生产出重组 AAV。重组 AAV 能感染培养细胞及体内不同组织如肺、脑、肌肉、视网膜、中枢神经系统和肝脏等。由于其安全性好、宿主细胞范围广(能感染分裂和非分裂细胞)、免疫源性低及在体内表达外源基因时间长等优点,在世界范围内的基因治疗和疫苗研究中得到广泛应用,被视为最有前途的基因转移载体之一。在医学研究中,重组 AAV 被用于多种疾病的基因治疗的研究(包括体内、体外实验);同时作为一种有特点的基因转移载体,还广泛用于基因功能研究、构建疾病模型,制备基因敲除鼠等方面。目前已发现的 AAV 至少有十几种血清型,它们主要的区别在衣壳蛋白 Cap 的不同,从而导致各种血清型 AAV 对不同组织和细胞的感染效率不同。目前,我公司已经可以生产 7 种不同的血清型 AAV,可用于感染绝大部分的细胞和组织。   不同血清型 AAV 及其感染组织亲和性 血清型 组织亲和性 AAV1 肌肉,神经组织,心脏,骨骼肌 AAV2 肌肉,中枢神经,肝脏,脑组织,眼 AAV5 中枢神经,肺,眼,胰腺 AAV6 肺,心脏 AAV8 中枢神经,肝脏,眼,肌肉 AAV9 肌肉,中枢神经,心脏,肺(肺泡),肝脏 混合型 肌肉,中枢神经,视网膜,肝脏,肺,肾脏 新品血清型 AAV10、AAV11、AAV12、AAV13........ 在神经领域的研究中,AAV 相对于其他病毒有着巨大的优势,本公司已有多种神经系统相关特异性启动子的现货 AAV。 神经系统特异性启动子腺相关病毒 病毒编号

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