哺乳动物稳定转染细胞系构建

实验 Q&A：如何用慢病毒转染构建稳转细胞系

这里说的稳转细胞系的构建是指慢病毒转染构建的稳转细胞系，可以构建表达细胞系，也能构建敲降细胞系，经常有人问我什么叫稳转和顺转的区别。瞬转细胞系，一般情况下能够稳定表达最多长一周左右，而稳转细胞系，只要构建成功就能稳定表达，没有时间限制，但是也不是肯定的，一般实验构建的细胞系超过 10 代以后，这个细胞系就有可能不靠谱了。接下来，咱们讲讲稳转细胞系的构建。一般来讲 shRNA 用的是 HIV 病毒，虽然已经经过处理，但是一听这名字也觉得渗人，无论如何保护自己是在实验室永葆青春的基础，所以一定

稳定转染细胞株的构建

1. 2 稳定转染细胞株的构建 原理： 稳定转染，就是转染的质粒DNA 整合到宿主细胞染色体上，使宿主细胞可 长期表达目的基因及蛋白。需要在瞬时转染基础上对靶细胞进行筛选或者应用高转染效率的病毒，根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物进行细胞传代，从而得到可稳定表达目的基因的细胞系。 应用：     观察目的基因及其表达蛋白在某种细胞中的功能（稳定，可长期进行研究） 一般流程：

转染实验大揭秘：转染到底是如何进行的

方面，稳定转染提供了不同治疗分子的生物生产方法。 基因抑制 转染的另一个常用用途是通过 RNA 干扰（RNAi）抑制特定蛋白质的表达。在哺乳动物细胞中，利用内源性表达的非编码 RNA，以 microRNA（miRNA）的形式-来源于双链 RNA (dsRNA) 前体-完成 RNAi。前体被加工成成熟 miRNA，成为 RNA 诱导的沉默复合物（RISC） 的一部分，抑制互补靶 mRNA 的翻译。 载体系统表达 miRNA 前体或短发夹 RNA（shRNA）前体，它们通过内源性机制分别生成 miRNA