哺乳动物稳定转染细胞系构建[HB-ST-01]

11个注意事项帮你搞定细胞转染

等）。上述方法中，实验室最常用的方法当属是脂质体转染（质粒转染）。 质粒转染操作简单，分为瞬时转染和稳定转染。针对不同属性细胞系，选择转让方式时要做足功课，千万不要图方便，否则转染效率简直崩溃。影响转染效率的因素有很多，比如准备不充分、转染条件不佳；再比如细胞株本身的特性和活性、细胞污染，转染的DNA/RNA的质量，转染方法，转染试剂的选择等，小编总结了这11个注意事项，一起来学习吧！ 01血清条件下的细胞转染 转染可以使用血清，前提是DNA-阳离子脂质体复合物形成时不含血清，否则会降低转染

shRNA文库：RNA干扰研究者的福音

技术的突破，科研工作者可以通过非常简单的方式直接从该文库中找到针对某特定基因的shRNA，无需耗时耗力的siRNA设计、合成和验证过程。 siRNA shRNA 使用代价 高 相对较低 持久性 最多2周 可选择获得稳定整合的细胞 宿主类型 细胞系 原代细胞，胚胎干细胞、细胞系 设计 复杂的设计方法 Completed 获取 需要合成 Completed 应用 瞬时转染 瞬时转染、稳定转染、病毒侵染 检测方法 Western杂交、 Western杂交、表型分析、RT

蛋白表达分析的金标准方法：WB（Western Blot）实验解析

核，不整合到细胞基因组，细胞分裂时质粒会逐步丢失[1,2]；转染后3–7天为蛋白表达高峰期，7天后表达量显著下降。 优点：实验周期短、操作简单、成本低、无需筛选； 适用：小量重组蛋白哺乳表达快速制备、蛋白互作、酶活筛选、突变体高通量验证； 缺点：无法长期稳定生产，批次表达量波动大，不适合大规模长期发酵。 Ø 稳定转染（Stable Transfection）[2] 重组蛋白CHO或293F稳定表达细胞系构建和筛选，外源DNA随机整合至细胞染色体基因组，通过抗性筛选获得稳定细胞株，细胞持续传代均可稳定