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- 武汉
- 2026年04月12日
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枢密科技
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慢病毒构建稳转细胞系
稳转细胞系（稳定表达细胞株）指在细胞中持续稳定表达特定基因或干扰特定基因表达。稳转细胞株的目的基因质粒DNA整合到细胞染色体上，使细胞长期稳定表达该基因。稳转细胞株包括多克隆稳转细胞株和单克隆稳转细胞株。慢病毒感染目的细胞后，通过抗性基因筛选得到的细胞株是多个细胞克隆的组合。单克隆细胞株是从多克隆细胞中经细胞克隆挑选得到的，由一个细胞扩增得到的细胞株。单克隆细胞株性状统一，传代过程中细胞的基因表达保持稳定。
枢密科技慢病毒采用三质粒系统转染293T细胞包装慢病毒颗粒，将Gag/Pol和载体分开，并且使用VSV-G的膜蛋白，包装出来的慢病毒宿主范围广，是基因转导的理想工具。
科研和临床应用
在基因劝能的研究中，稳定表达细胞株弥补了在一些功自B实验中瞬时感染（或转染）由于外源基因表达时间短的缺陷，便于长期观察基因对于细胞功能的影响以及蛋白质间相互作用。
服务流程
基因/模板DNA合成+载体构建+慢病毒包装+收获病毒液+q-PCR检测病毒滴度测定+慢病毒稳转细胞株筛选=稳转细胞株
单克隆细胞系筛选
对感染并筛选后的细胞进行稀释培养，挑取单一细胞生长而成的细胞克隆,再进行扩大培养，以获得性状单一，表达稳定的细胞株。
1.将细胞消化后接种于96孔板中，接种的细胞密度为1个孔；
2标记出具有单个细胞的孔，将Puromycin浓度减至维持浓度(筛选浓度的1/2-14)，继续筛选和扩增；
3.扩增完毕后，收集细胞进行qPCR或Westem Blo鉴定，选择鉴定结果正常的单克隆细胞冻存保种。
混合克隆细胞系筛选
将Puromycin浓度减至维持浓度(筛选浓度的1/2-1/4)，继续对感染后的细胞进行筛选和扩增，同时收集细胞进行qPCR或Westem Blol鉴定(鉴定目的基因表达水平)，并将鉴定结果正常的细胞冻存保种。
最终交付
慢病毒病毒滴度检测报告；稳转细胞株；实验报告，包括实验流程、测序结果和峰图、引物序列、载体图谱和滴度测定报告和q-PCR稳转株的检测等。
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文献和实验这里说的稳转细胞系的构建是指慢病毒转染构建的稳转细胞系，可以构建表达细胞系，也能构建敲降细胞系，经常有人问我什么叫稳转和顺转的区别。瞬转细胞系，一般情况下能够稳定表达最多长一周左右，而稳转细胞系，只要构建成功就能稳定表达，没有时间限制，但是也不是肯定的，一般实验构建的细胞系超过 10 代以后，这个细胞系就有可能不靠谱了。接下来，咱们讲讲稳转细胞系的构建。一般来讲 shRNA 用的是 HIV 病毒，虽然已经经过处理，但是一听这名字也觉得渗人，无论如何保护自己是在实验室永葆青春的基础，所以一定
myskite 将以构建的microRNA质粒稳转至细胞系，有人做过吗，分享一下。 bioenw 我做过miRNA的稳转实验，我们可以进行交流。 版主zhujoker留言: 不要轻易留邮箱以及联系方式。可以站内PM，也不要变相打广告 myskite 我已经构建了pcDNA3.1(+)-premiR的表达载体，正在准备细胞。据说，这个实验，细胞爱死
实验室里大家都埋头做实验，可为什么老板每次都骂我们，你都快 30 的人了这也不会那也不会，白长这么大了，栽培了你那么多年到头来啥也指望不上。对此，我深感委屈，那个细胞我养了那么久，它还是那样衣来伸手饭来张口，我有怪过谁么？首先，这么大的细胞了，除了要自己学会传代之外，鄙人对你们还有更高的要求，你该学会自己做实验了。来，先跟我说说细胞系和细胞株的区别。细胞：原代培养物经过第一次传代成功的细胞就是细胞系，可泛指一般可能传代的细胞。而通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志
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