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- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
57
- 英文名：
大提无内毒素质粒 DNAout
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海邦景
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
10 次
1．CTAB 溶液在低于15℃时会析出沉淀，因此在将其加入冷冻的植物材料中之前必须预热。
2．在最适条件下，DNA—CTAB 沉淀呈白色纤维状，很容易一下子就从溶液中钩出。不过，某些植物种的DNA 沉淀中可能含有杂质，特别是多糖，使DNA 沉淀呈絮状或胶状，这种情况下可能需要稍事离心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。
3．饱和酚虽然可有效地使蛋白质变性，但酚不能完全抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用和氯仿的混合液，可减轻这两种现象，同时可加入适量的（—氯仿—=25:24:1），的作用是消泡，并使蛋白质层紧密，使水相和有机相分层较好。 细菌的培养和收集 将含有质粒pBS 的DH5α菌种接种在LB 固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA 十分有用。这些方法共同特点是简便、快速，能同时处理大量试样,所得DNA 有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。
点击了解更多DNA纯化产品：
大提无内毒素质粒 DNAout10 次规格详细介绍：
公司的RNA/DNA提取目录有下面10个系列，5000余种产品
1、RNA纯化系列产品
2、DNA纯化系列产品
3、电泳及回收系列产品
4、探针标记及检测系列产品
5、核酸扩增系列产品
6、克隆表达系列产品
7、基因组研究系列产品
8、蛋白质研究系列产品
9、细胞生物学研究系列产品
10、即用型溶液、质粒库、菌种库等等
以下是大提无内毒素质粒 DNAout10 次规格的相关产品：
小鼠白介素2可溶性受体α链(IL-2sRα/CD25)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
Human deoxyribonuclease I (DNase- I) ELISA Kit 人脱氧核糖核酸酶Ⅰ(DNase-Ⅰ)ELISA试剂盒
Human1,25-dihydroxyvitaminD3,DVD/DHVD3ELISAKit 人1,25二羟基维生素D3(1,25-(OH)2D3/DVD/DHVD3)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
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重组腺病毒PCR鉴定试剂盒20次
HumansolubleE-selectin，sE-selectinELISAKit人可溶性E选择素(sE-selectin)ELISA试剂盒规格：96T/48T
猪胰岛素样生长因子结合蛋白Ⅱ(IGFBP-Ⅱ)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
Human cyclic guanosine monophosphate (cGMP) ELISA Kit 人环磷酸鸟苷(cGMP)ELISA试剂盒
RabbitUrokinase-typePlasminogenActivatorReceptor,PLAUR/uPARELISAkit 兔尿激酶型纤溶酶原激活物受体(PLAUR/uPAR)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
CLIAKitforAP12(Mouseapelin12)ELISAKit小鼠apelin12规格：48T/96T
血清样品树脂法去内毒素试剂盒20次
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转氢酶-1试剂盒 紫外分光光度法 50管/48样
转氢酶-2试剂盒 紫外分光光度法 50管/48样
α戊二酸脱氢酶（α-KGDH）测试盒 紫外分光光度法 50管/48样
柠檬酸（CA）含量测试盒 可见分光光度法 50管/48样
包姜氏琼脂培养基250g用于百日咳菌分离培养
麦康凯琼脂 乳糖发酵基础上鉴别分离肠杆菌 500g incubation media 麦康凯琼脂 乳糖发酵基础上鉴别分离肠杆菌 500g
长野解普鲁兰杆菌 模式菌株。产耐高温耐酸性普鲁兰酶 支/瓶
含Bolton肉汤均质袋用于空肠弯曲菌的增菌培养
BPLS琼脂 250g 用于药品等多种标本中沙门氏菌检验选择性分离培养(美国药品和欧洲药品检测推荐方法)
Skirrow琼脂配套试剂 规格： 10支/盒 用途： 每支添加于100mL的 Skirrow琼脂基础中
改良CCD琼脂配套试剂 规格： 10支/盒 用途： 每支添加于100ml（022212）中配成MLST
Bolton肉汤配套试剂 规格： 10支/盒 用途： 每支添加于100mL的 Bolton 肉汤基础中
万古霉素(改良月桂基盐胰蛋白胨肉汤冻干配套试剂) 规格： 10支/盒 用途： 每支添加于100ml（022212）中配成MLST
大提无内毒素质粒 DNAout10 次规格Iron琼脂250g用于产
28982 技术琼脂粉(进口) BR 500g 培养基凝固剂，透明度高，凝固温度为35℃ incubation media 28982 技术琼脂粉(进口) BR 500g 培养基凝固剂，透明度高，凝固温度为35℃
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察氏液体培养基 250g 用于测定真菌孢子发芽率
操作步骤:
1. 大提无内毒素质粒 DNAout10 次规格匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml，用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c．细胞悬液 离心收集细胞，每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol，反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
2．将匀浆样品在室温（15-30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。
3．可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或胞外物质（肌肉，植物结节部分等）可于2-8℃10000×g离心10分钟，取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织时，上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中，水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中，如要分离DNA和蛋白质可保留有机相，进一步操作见后。用沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml，室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟，离心前看不出RNA沉淀，离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
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文献和实验只适合酶切测序等。而我用无内毒素大提试剂盒时，就没出现这种情况，溶度有1000多微克每毫升。所以，建议：1.要转染最好就用无内毒素大提试剂盒2.已小提，想纯化滤菌用于转染建议参考“将质粒溶液进行浓缩，每50微升质粒溶液加2微升5mol/L NaC1混匀，冷的无水乙醇沉淀质粒，10 000r/min离心5min，弃去上清，用70% 的乙醇洗1次，无菌条件下真空干燥，以灭菌生理盐水溶解质粒至质量浓度为1 微g/微L，一20度保存。质粒转染前，行酶切及测序鉴定。”
等。 PCR 产物 两种方式：一种纯化后直接酶切连接；一种连 T 载体再往下切连接。我个人强烈建议第二种，连 T 载体。因为 PCR 产物直接酶切我觉得有两个缺点：①由于两头把手太短，虽说有保护碱基，但我觉得还是不如从质粒上往下切好切，而且容易切坏、切碎；②无法从电泳上看出来切没切开，因为也就切下了几个十几个 bp，带形没啥变化。连 T 载体的优点：①进载体后，大提一次的质粒夸张点说够用一辈子的，再说 PCR 那东西还不太稳定，一把多一把少的。②酶切会很清晰，切下来了就是有带，没切动
特异性更高。您可以根据实验设计需要进行选择。 2、慢病毒包装载体：Cas9 慢病毒表达载体采用 3 质粒慢病毒系统。您可使用我公司的 pH1、pH2；addgene 载体 psPAX2、pMD2.G 或者 pCMV-dR8.2 dvpr、pCMV-VSVG 均可包装成功。 3、无内毒素质粒提取试剂盒。使用质量可靠的质粒提取试剂盒可以提供更高的转染效率和病毒包装效率。我们采用 Qiagen 的 Plasmid Plus 系列产品可以取得满意的包装效果。 4、转染
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