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39
- 英文名:
详见说明书
- 保质期:
详见说明书
- 供应商:
上海研生
- 保存条件:
低温冷藏
- 规格:
10 次
以下是大提无内毒素质粒 DNAout10 次说明书的详细介绍,点击了解更多DNA纯化产品:
操作流程:
1.大提无内毒素质粒 DNAout10 次说明书根据要保存的各样本的体积,计算出所需RNAwait用量。RNAwait的用量应当是组织体积的10倍(如100mg组织约用1ml RNAwait);离心收集2×106细胞RNAwait的用量是1ml。
2. 将RNAwait按需要量分装入自备保存管中;
3. 快速将较大的组织切成厚度<0.5 cm的任意片状,立即完全浸入RNAwait中。组织的厚度一定要<0.5 cm。组织过厚则RNAwait不能有效渗入,组织中间部位的RNA不能受到保护。较小的组织(如大鼠的肾脏、脾脏,小鼠的大部分器官)取下后可以直接浸入RNAwait。
4. 保存时先将样本浸入RNAwait后置4℃冰箱过夜(4℃过夜是必需的,这样可使RNAwait完全渗入到组织中),然后转移到-20℃冰箱(RNAwait在-20℃时仍为液态,有结晶析出,是正常情况);或者在4℃冰箱过夜后,从RNAwait中取出组织块,转移到-80℃冰箱。在RNAwait中保存的标本,反复冻融至室温20次不影响RNA的质量。
实验要点 :
1.大提无内毒素质粒 DNAout10 次说明书CTAB 溶液在低于15℃时会析出沉淀,因此在将其加入冷冻的植物材料中之前必须预热。
2.在最适条件下,DNA—CTAB 沉淀呈白色纤维状,很容易一下子就从溶液中钩出。不过,某些植物种的DNA 沉淀中可能含有杂质,特别是多糖,使DNA 沉淀呈絮状或胶状,这种情况下可能需要稍事离心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。
3.饱和酚虽然可有效地使蛋白质变性,但酚不能完全抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用和氯仿的混合液,可减轻这两种现象,同时可加入适量的(—氯仿—=25:24:1),作用是消泡,并使蛋白质层紧密,使水相和有机相分层较好。 细菌的培养和收集 将含有质粒pBS 的DH5α菌种接种在LB 固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。非冻型组织RNA保存液 小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA 十分有用。这些方法共同特点是简便、快速,能同时处理大量试样,所得DNA 有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。
储存事项:
A. 在RNase A管和DNase I管分别加入1毫升的裂解缓冲液吹打,颠倒混匀,充分溶解RNase A和DNase I后,按照每次使用量分装-20℃冻存,有效期6个月。
B. 结合液LB低温时可能出现析出和沉淀,可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解,恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
C. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。
以下是大提无内毒素质粒 DNAout10 次说明书的相关产品:
兔抗IGFBP3多克隆抗体 英文名:Anti-IGFBP3 rabbit polyclonal antiboy 冷冻(-20℃) 避光
兔抗HAC10多克隆抗体 英文名:Anti-HAC10 rabbit polyclonal antiboy 冷冻(-20℃) 避光
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Anti-ACAP1 rabbit polyclonal antiboy 英文名:Anti-ACAP1 rabbit
大提无内毒素质粒 DNAout10 次说明书表小檗碱(标准品) Epiberberine 1816598 质量规格:HPLC≥98%,标准品
白藜芦醇 CAS 规格: 40mg 订购|咨询
滨蒿內酯(标准品) Scoparone 120-08-1 质量规格:HPLC≥98%,标准品
三七皂甙R1; 三七皂苷R1 CAS 80418-24-2 规格: HPLC≥98%,20mg/支 订购|咨询
DL-薄荷醇 DL-Menthol 89-78-1 质量规格:HPLC≥98%,标准品
苯甲酰次原碱 CAS 规格: HPLC≥98%,20mg/支 订购|咨询
薄荷醇(标准品) Menthol 2216-51-5 质量规格:HPLC≥98%,标准品
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补骨脂定(标准品) Psoralidin 18642-23-4 质量规格:HPLC≥98%,标准品
D(十)-无水葡萄糖 CAS 50-99-7 规格: HPLC≥98%,100mg/支 订购|咨询
补骨脂二氢黄酮;补骨脂甲素 Bavachin 19879-32-4 质量规格:HPLC≥98%,标准品
大黄 对照品 CAS 规格: 1g 订购|咨询
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文献和实验只适合酶切测序等。而我用无内毒素大提试剂盒时,就没出现这种情况,溶度有1000多微克每毫升。所以,建议:1.要转染最好就用无内毒素大提试剂盒2.已小提,想纯化滤菌用于转染建议参考“将质粒溶液进行浓缩,每50微升质粒溶液加2微升5mol/L NaC1混匀,冷的无水乙醇沉淀质粒,10 000r/min离心5min,弃去上清,用70% 的乙醇洗1次,无菌条件下真空干燥,以灭菌生理盐水溶解质粒至质量浓度为1 微g/微L,一20度保存。质粒转染前,行酶切及测序鉴定。”
1. 质粒载体构建不成功(目的片段和载体不能成功连接)的常见原因分析 ①DNA 片段纯度差:体系中的杂质会降低连接效率,如果使用不纯化直接连接的方法一直无法成功构建载体,可以考虑进行纯化后再进行连接; ②目的片段和载体片段使用比例悬殊,或者用量过多或过少:目的片段和载体的摩尔比需要控制在一定范围之内,否则会影响连接效率,具体比例可以草靠连接酶说明书; ③连接条件不当:比如连接时间不足、温度不合适、酶失活等,可以通过设置对照组来排查原因; ④引物设计问题:比如通过无缝克隆的方式进行连接,同源
,Sigma)。 8、293V 培养基:DMEM 高糖培养基+10%FBS;病毒培养基:DMEM 高糖培养基+10%FBS,丙酮酸钠 1 mM。 二、简要实验流程 293V 细胞铺板→转染质粒制备→收集病毒上清→纯化病毒 三、实验前准备 质粒准备:Cas9 表达慢病毒载体和包装载体需要用无内毒素质粒提取试剂盒制备。制备方法请按照试剂盒的说明书进行。 包装细胞准备:包装慢病毒可以用 HEK293、HEK293T 或者我公司的 293V 细胞。293
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