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RT-PCR

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  • 经反转录酶的作用把RNA逆转录成cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA产物。
  • 天津
  • 2026年01月23日
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      天津科斯莫生物科技有限公司

    • 服务名称

      RT-PCR

    RT-PCR
    原理:
    经反转录酶的作用把RNA逆转录成cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA产物。

    服务流程:
    1. 样品RNA的提取;
    2. RNA质量检测;
    3. 反转录cDNA。

    相关要求:
    客户提供待测样本信息。

    最终结果:
    1. 反转录cDNA模板;
    2. 原始实验数据;
    3. 具体试验流程(包括:实验步骤;主要仪器及试剂说明(含仪器厂家、型号;试剂厂家、批号)
     
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    • RT-PCR 引物的选择

      随机引物 适用于长的或具有发卡结构的 RNA。适用于 rRNA、mRNA、tRNA 等所有 RNA 的反转录反应。主要用于单一模板的 RT-PCR 反应。 Oligo dT 适用于具有 PolyA 尾巴的 RNA。(原核生物的 RNA、真核生物的 Oligo dT rRNA 和 tRNA 不具PolyA 尾 巴。)由于 Oligo dT 要结合到 PolyA 尾巴上,所以对 RNA 样品的质量要求较高,即使有少量降解也 会使全长 cDNA 合成量大大减少。 基因特异性引物 与模板序列互补

    • 定量RT-PCR (Quantitative RT-PCR

      A = B(1+e) n A=amplified products, B=input templates, n=cycle number, and e=amplification efficiency. Factors affecting amplification efficiency in the RT-PCR process include the efficiency of reverse

    • RT-PCR 原理与实验技术

      性由两个人工合成的引物序列决定。反应分三步: A.变性:通过加热使 DNA 双螺旋的氢键断裂,形成单链 DNA; B.退火:将反应混合液冷却至某一温度,使引物与模板结合。 C.延伸:在 DNA 聚合酶和 dNTPs 及 Mg2+存在下,退火引物沿 5‘ —— 3’ 方向延伸。 以上三步为一个循环,如此反复。 3. 逆转录酶和 RT-PCR 逆转录酶(reverse transcriptase)是存在于 RNA 病毒体内的依赖 RNA 的 DNA 聚合酶,至少具有以下三种活性: (1)依赖 RNA

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