RT-PCR实验服务

上海信帆生物提供Q-PCR,RT-PCR,miRNA，mRNA实验服务！

简介：RT-PCR（实时荧光定量PCR）实验服务


服务名称：RT-PCR（实时荧光定量PCR）实验服务

RT-PCR简介:

RT-PCR称为反转录PCR，实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。

RT-PCR实验流程：

1.实验用品准备；

2.样本总RNA提取；

3.RNA浓度检测；

4.反转录；

5.数据分析及结论。

客户方提供：

细胞、组织、血液或cDNA样本。

提供结果：

实验结果包含：扩增曲线，溶解曲线，引物信息，数据及数据分析，RNA浓度测定，操作步骤及所需实验仪器和试剂

数据分析包括： 平均值，△CT=CT目的基因-Ct16S，△△CT=△CT实验-△CT对照，表达倍数=2-△△CT

RT-PCR实验外包，mRNA、miRNA、lncRNA、DNA实验代测

服务内容：

1.制定个性化实验方案：根据不同的实验目的确定实验方案、选定合适的内参；
2.检测类别：mRNA、miRNA、lncRNA、DNA；
3.样本抽提及质检：对客户提供样本进行RNA抽提，并利用NanoDrop进行样本质检；
4.定量PCR预实验：包括样本反转录为CDNA、配置PCR反应体系及进行Real-TimePCR反应；
5.正式定量PCR实验：根据预实验结果进行正式实验；
6.数据分析：采用2- △△CT法进行分析，比较不同样本间差异。

服务要求：
1.请提供组织样本，细胞样本，血浆或血清样本，totalRNA；
2.请提供已知的全长基因序列或GeneBank号；
3.请提供尽可能详细的背景资料：DNA/RNA来源、基因丰度等。

结果内容：整理好的报告，样本收到之日起5个工作日内反馈质检结果。

结果展示：

样本质检图

 

溶解曲线：

 

扩增曲线

数据统计

每个指标有2张图。一张是扩增曲线，另一张是熔解曲线，用来证明PCR扩增中无非特异性扩增

 

送样运输要求：

1. 样品处理

a. 动物组织：常规组织，脂肪组织，结缔组织，纤维化组织适当增加。将组织剪切成合适大小后（建议组织块长宽高均不大于0.5 cm），然后迅速浸泡于5～10倍体积的RNATM试剂中。（注意：已浸入RNATM试剂中的组织经平衡一段时间后，可从溶液中取出，切成更小的组织块，再重新放回RNATM试剂中；有些比较弱的液体渗透性组织如骨头等，不适合用RNATM试剂进行RNA保护。）

b.植物组织：新鲜的叶、果肉、种子最少100 mg。将嫩叶，嫩茎组织切成合适的大小（建议长宽高均不大于0.5 cm）后，然后迅速浸泡于5～10倍体积的RNATM试剂中。（注意：某些植物组织天生具有的屏障，如叶子表面的蜡层可阻碍RNATM试剂的渗透，对于此类组织，通常需破坏这些屏障层以允许溶液的浸透。）

c.细胞等样本：收集不小于10^6个细胞的沉淀（用PBS清洗1-2次）。之后迅速加入5～10倍体积的RNATM试剂。

d.酵母、细菌等样本：离心弃上清，收集小米粒大小的单菌体沉淀，然后迅速加入适量的RNATM试剂浸没菌体沉淀。
e. RNA样品： OD260/280为1.8-2.0，浓度≥100 ng/μL，体积≥20μL，干冰运输。

f.cDNA：cDNA原液≥20 μL，干冰运输。

Real -Time PCR，即实时监测PCR扩增产物并进行解析的方法，它是在PCR反应体系中加入荧光物质，并通过Real -Time PCR检测系统对PCR反应进程中的荧光信号强度进行实时监测，终对实验数据进行分析处理的方法。Real -Time PCR自1996年由美国Applied Biosystems公司推出以来，广泛应用于生物研究的各个领域。目前主要有SYBR Green 染料、Taqman探针法两种。

PCR实验代测，荧光定量PCR代测服主要仪器及耗材
旋涡振荡器 ：上海青浦泸西仪器厂产品
手握式电动匀浆机：德国FLUKO 公司产品
低温冷冻离心机：Sigma（3K15）公司产品
Real-time检测仪：ABI （ABI-7300）公司产品
超纯水分离系统：美国LABCONCO公司
离心管及10μL、200μL、1000μL枪头等常规耗材均为国产；RNA提取过程中所需的离心管、枪头等耗材经过0.1%的DEPC水浸泡过夜，121℃灭菌30min，烘干后备用。

PCR实验代测，荧光定量PCR代测服实验室试剂的操作
1)所用的所有溶液都应该没有核酸和(或)核酸酶(DNase和RNase)污染。
2)所有PCR试剂中使用的水都应该是高质量的-新鲜蒸馏的去离子水，用0.22μm过滤的，并且是高压灭菌。
3)在20℃到25℃贮存的试剂建议加点像叠氮NA一类的抗微生物剂，在扩增试剂或样品制备试剂中加入0.025%的叠氮NA不抑制扩增反应。
4)所用试剂都应该以大体积配制，实验一下看试剂是否满意，然后分装成仅够一次使用的量进行贮存。
5)所有试剂和样品准备过程中都要使用一次性灭菌的瓶子和管子。
6)新配制的试剂在用于准备新的标本之前应该加以检验。
7)样品准备和前PCR区所使用的移液管在不使用时都应该小心保存。

 

尊敬的客户：
本公司有放免技术服务、蛋白质组学服务、免疫组化、PCR技术服务、生物信息学数据分析等，如果您想了解Q-PCR,RT-PCR的更多内容或者其他服务信息，您可以拨打本公司的服务热线了解更多产品的详细信息，至善至美的服务是我们永无止境的追求，欢迎新老客户放心选购自己心仪产品，我们将竭诚为您服务！