北京现货T7体外转录试剂盒(国产,进口)

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名称：北京现货T7体外转录试剂盒(国产,进口)
规格：50次
产地：国产|进口
英文名：T7 in vitro Transcription Kit
本试剂盒是基于T7 RNA聚合酶的RNA体外转录试剂盒，它利用含有T7启动子的模版DNA，以NTP为底物，从T7启动子下游开始合成与模版DNA中一条链互补的RNA，简单快速获得大量的RNA分子。

产品特点：
1. 即开即用，用户只需提供含T7启动子的DNA模板即可以进行体外转录实验，不需要单独准备每一个成份。
2. 单溶液预配液，减少加样次数，避免了操作误差，增加了可重复性。
3. 模版DNA可以是线性化的质粒DNA，也可以是PCR扩增产物。
4.可以合成的RNA的最佳长度在20nt到2000nt之间。
5.产品配方经过精心优化，每μg DNA模版可以合成2-6μg RNA。
6. 得到的RNA可以用于RNA 结构研究、核酶生物化学、体外翻译、RNA-蛋白质相互作用、反义技术、SELEX技术和RNA干扰(RNAi)等实验。

试剂盒组成：

 

成分	规格
转录预配液(2×)	0.5mL
阳性对照DNA(1.3 Kb片段)	20μL(10ng/μL)
T7 RNA聚合酶	50μL
RNase-free水	1mL
说明书	1份

储存条件：-20℃保存、有效期一年。

使用方法：

一、制备DNA模板(本试剂盒不含所需试剂，此处信息仅供参考)

PCR片段和质粒DNA都可以用作体外转录的模板，但是必须注意以下几点。
1)必须使用线性化的DNA。如果是质粒DNA，则必须先用适当的限制性内切酶切成线状。
2)是需要转录的DNA序列的上游必须有T7启动子。如果模板是PCR产物，则可以在设计引物时将T7启动子序列(5´TAA TAC GAC TCA CTA TAG GG 3´)加上。如果是将DNA片段克隆到载体上，则需要选择有T7启动子的载体，并且克隆位点必须位于T7启动子一、制备DNA模板(本试剂盒不含所需试剂，此处信息仅供参考)

PCR片段和质粒DNA都可以用作体外转录的模板，但是必须注意以下几点。
1)必须使用线性化的DNA。如果是质粒DNA，则必须先用适当的限制性内切酶切成线状。
2)需要转录的DNA序列的上游必须有T7启动子。如果模板是PCR产物，则可以在设计引物时将T7启动子序列(5´TAA TAC GAC TCA CTA TAG GG 3´)加上。如果是将DNA片段克隆到载体上，则需要选择有T7启动子的载体，并且克隆位点必须位于T7启动子下游。
3)需要转录的DNA序列的下游端最好不要是3´突出。如果是3´突出(比如选择了Pst I来线性化质粒)，则最好用T4 DNA聚合酶修平。
4)必须保证DNA模板中没有RNase。由于提取质粒DNA的过程中一般要使用大量的RNase A，因此质粒DNA一般都有严重的RNase A污染，所以在用作模板前，最好采取胶回收得方法回收质粒DNA。并且加入少量总RNA一起保温，然后电泳检测RNA是否被降解，以此来判断纯化的DNA模板是否有残留RNase A。

二、体外转录反应
1.在一个RNase-free的塑料离心管中，在室温下(不是在4℃下)按次序加入下列成分：

成分	加入量	备注
DNA模板		如果使用质粒DNA,必须反复酚-*仿抽提去除残留的RNase,然后再乙醇沉淀质粒DNA需室温时使用
PCR片段	50ng左右
质粒DNA	1μg左右
阳性对照	4μL
转录预配液，2×	10μL
T7 RNA聚合酶	1μL
RNase-free水	补水到20μL

注：此为20μL反应体系的用量，对其他反应体系，各成分的用量可以按比例增减。如果需要标记RNA探针，则需要订购NTP分开的试剂盒。如果需要得到加帽RNA，则需要加入自备的加帽修饰核苷酸。
2. 37℃保温1-2小时。注意：延长保温时间并不能提高产量。
3. 70℃加热10分钟灭活T7 RNA聚合酶。
4. 取1-3μl电泳检测转录效果。一般1μg DNA可以合成 5-10μg的RNA。
5. 得到的RNA可以放-80℃保存。

三、去除DNA模板(所需试剂可从本公司另购)
1.在体外转录体系中加入1μL自备的RNase-free DNase(3-5U/μL)。
2. 37℃保温15-30分钟。
3. 补水到100μL。
4. 用自备的等体积(100μL)的Tris饱和酚-*仿抽提一次去除残留的DNase和RNA聚合酶。
5. 加自备的200μL微量核酸沉淀剂(用前需要摇晃混匀)，振荡后15000rpm离心3～5分钟，弃上清。
6. 加入1mL 75%乙醇，震荡10秒后15000rpm离心3～5分钟，弃上清。
7. 短暂离心数秒，用枪头吸弃上清。
8. 晾干，所得沉淀即体外转录所得的RNA。可溶于RNase-free水中后立即使用或放-80℃长期保存。

疑难解答：
1、没有RNA产物。最常见原因是模板有RNase污染，可用纯化的RNA跟模板DNA一起保温，再检测RNA是否降解。还可以增加RNase Inhibitor用量，本试剂盒缓冲液和酶混合液中有RNase inhibitor，如果模板RNase污染严重，可能需要用户补加RNase inhibitor。
2、RNA产量低。最常见的原因是DNA模板。在转录序列的第一个和第二个碱基最好都是G，在前14个碱基内避免有U存在。
3、RNA长度比预期的短。可能是模板序列中有T7 RNA聚合酶的终止序列。可以改用SP6体外转录试剂盒(启动子也必须改成SP6启动子)。
4、RNA长度比预计的长。T7 RNA聚合酶跟Taq DNA聚合酶一样，有不依赖于模板的加尾功能，最多有一半的RNA可以带一个或两个碱基的尾巴。如果RNA长度比预计的长很多，使用的模板又是质粒DNA，则可能是质粒DNA线性化不彻底。
5、5´单磷酸还是三磷酸。如果使用GTP，则得到的RNA是三磷酸，体外转录时如果保温时间太长(如12小时)，则有50%的三磷酸会变成单磷酸。如果在转录体系中加入GMP，则T7 RNA聚合酶将优先使用GMP，所得RNA产物中5´端是单磷酸的比例将大大增加。

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本产品为专门针对Nylon膜的核酸杂交封堵液，用于降低检测时的非特异性信号，降低背景，增强信噪比。即开即用，方便快捷。

储存条件：低温运输、-20℃保存，有效期一年。

·电泳级丙*(代"烯")酰胺干粉型
编号：BTN100864
英文名称：acrylamide，electrophoresis grade，powder
规格：200mL
本产品是电泳级丙*(代"烯")酰胺溶液(BTN80931)的升级产品。

产品特点：
1.以干粉形式提供分装好的丙*(代"烯")酰胺和甲叉双丙*(代"烯")酰胺，避免了丙*(代"烯")酰胺溶液不能长期存放的问题。
2. 粉末已经提前分装到瓶中，用户只需加入去离子水溶解即得30%的丙*(代"烯")酰胺溶液，用户不需要称量有毒的成分。
3. 丙*(代"烯")酰胺和甲叉双丙*(代"烯")酰胺分开提供，用户可以根据不同实验使用不同的比例。

产品组成：

成分	规格
丙*(代"烯")酰胺干粉	60g
甲叉双丙*(代"烯")酰胺干粉	3g
去离子水	250ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，避光保存，有效期一年(配成溶液后只能4℃存放2个月)。

使用方法：
1. 配制 30%丙*(代"烯")酰胺溶液:在本产品提供的装有60 g 丙*(代"烯")酰胺干粉的塑料瓶中加入146mL 去离子水，充分摇晃直到溶解即得200mL 30%丙*(代"烯")酰胺溶液(用手大约摇10-20分钟)。
2. 配制 30%丙*(代"烯")酰胺-甲叉双丙*(代"烯")酰胺(19:1)溶液(30% AB溶液，下同)：
 不同实验需要加入不同比例的甲叉双丙*(代"烯")酰胺。对SDS-PAGE电泳，丙*(代"烯")酰胺与甲叉双丙*(代"烯")酰胺比例一般在19:1左右，因为此时PAGE胶的孔径最小，分辨率最高。制备方法是将3 g甲叉双丙*(代"烯")酰胺干粉加入到200mL上步配好的30%丙*(代"烯")酰胺溶液中(注意：甲叉双丙*(代"烯")酰胺干粉有神经毒性，避免吸入粉末)。配好的30%ＡＢ溶液最好4℃避光保存并在1月内用完。


北京现货T7体外转录试剂盒(国产,进口)关键词：T7 in vitro Transcription Kit,T7体外转录试剂盒,BTN91106

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