北京现货pRT20-T载体克隆试剂盒(国产,进口)

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北京现货pRT20-T载体克隆试剂盒(国产,进口)由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于科研目的生化试验项目，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多pRT20-T载体克隆试剂盒等克隆与表达产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：北京现货pRT20-T载体克隆试剂盒(国产,进口)
英文名：pRT20-T vector
编号：RFT110
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
pRT20-T 载体是一种高效克隆PCR产物(TA Clonging)的专用载体。它是由pUC19载体改造成的(pRT20-T载体在pUC19质粒MCS位点附近插入T7启动子序列)，MCS位点经过EcoR V酶切后在两侧的3’端添加”T”制备而成。因大部分Taq酶会在PCR产物的3’末端添加一个“A”，所以用本载体可以高效地进行PCR产物克隆。

试剂盒组份：

 

内容	浓度	总量
pRT20-T vector	25 ng/μl	20μl×1支
2×ligation solution	-	150μl×1支
Control insert(700bp)	12.5 ng/μl	10μl×1支
M13F(-47)	10μM	20μl×1支
M13R(-48)	10μM	20μl×1支
Water(RNase-free,DNase-free)	-	1ml×1支

本载体在pUC19载体的基础上对LacZ基因的编码序列进行了改造，加强了重组菌落在X-gal/IPTG/Amp/LB琼脂平板上的颜色筛选，具有更明显的蓝色菌落颜色，大大降低了假阳性率。由于在MCS位点附近插入了T7启动子序列，因此可以对插入DNA片段直接进行体外转录实验。



本载体在插入位点两侧各有一个BamH I位点，可以用BamH I直接酶切检测重组子，简化了检测程序。按照标准连接体系计算(10μl体系用1μl载体)，本载体可至少使用20次。包装内含有了2×ligation solution，是混合有T4 连接酶，连接buffer以及连接增强剂的MasterMix，使用方便，且能显著提高连接效率。另外，包装内提供M13引物，可以方便用菌落或菌液PCR快速检测阳性克隆。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。

更多有关北京现货pRT20-T载体克隆试剂盒(国产,进口)的价格及使用说明等，请联*(代"系")我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销*(代"售")以下产品：

·高效高保真DNA聚合酶
编号：RFT103
英文名称：Taq plus DNA Polymerase
规格：500U(100μl)|5×500U(5×100μl)
Taq plus DNA Polymerase是由pfu DNA Polymerase和Taq DNA聚合酶按照一定的比例混合而成，具有扩增效率高，错配率低的特点。与Taq DNA聚合酶相比，Taq plus DNA聚合酶具有扩增长度长，保真性好的优点；与pfu DNA聚合酶相比，具有扩增速度快，反应效率高的优点。此酶具有比Taq DNA聚合酶约3倍的PCR可信度。该酶的大多数PCR产物3’端带碱基A，可以通过TA克隆法进行克隆。适用于要求保真性和高效率的PCR反应，大多数情况下可以替代Taq DNA 聚合酶。

产品组成：
Taq plus DNA Polymerase(5U/μl)——————————100μl
10×Taq plus PCR buffer(含Mg2＋)——————————1ml

活性定义：1单位(U) Taq plus DNA Polymerase活力定义为在74℃、30分钟内，以活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸不溶物质所需的酶量。

贮存液：50 mM Tris-HCl (pH 8.0); 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 50 mM KCl ; Stabilizers; 50% glycerol

使用方法：
1、按照下表在0.2ml PCR管中制备反应体系：

成分	体积	终浓度
Template	0.1-1μg	as you wish
Primer 1(10μM)	1μl	200nM
Primer 2(10μM)	1μl	200nM
10×Taq plus PCR buffer	5μl	1×
dNTP Mixture(10 mM)	1μl	200μM each
Taq plus(5 U/μl)	0.5-1μl	2.5-5U
ddH2O	up to 50μl	-

2、混匀后，离心快甩将反应液收集到管底。
3、PCR仪如果没有热盖加热的话，补加25μl矿物油。
4、PCR仪上执行以下程序：

步骤	温度	时间	循环数
初始变性	94℃	1-5 min	1
变性	94℃	30 sec	25-40*
退火	Tm-5℃*	30 sec
延伸	72℃	1 min/kb
最后延伸	72℃	5 min	1

*注： PCR 反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况，设定最佳的反应条件(温度、时间等)。

常见问题分析：
1、Taq plus DNA polymerase能扩增多长片段？
对简单模板(如λ噬菌体做模板)，可以扩增 kb片段；对复杂模板(如基因组DNA)，可以扩增 kb片段。
2、Taq plus DNA polymerase保真性怎样？
Taq plus含有3’-5’校对活性的聚合酶，有校对功能。保真性为普通Taq酶的3倍。
3、使用Taq plus DNA polymerase的扩增产物是否可以进行TA克隆？
由于使用Taq plus得到的PCR产物大多数带有A，可以进行TA克隆。
4、Taq plus DNA polymerase可以扩增高GC含量片段吗？
Taq plus可以扩增高GC含量片段，建议使用Taq plus配合2×GC buffer使用，而不建议使用10×Taq plus PCR buffer。

储存条件：-20℃，有效期一年。


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·JM110化学感受态细胞
编号：RFT114
英文名称：JM110 Competent cell
规格：20×100μl
本公司生产的JM1110感受态细胞采用经特殊工艺处理得到，可用于DNA的化学转化。使用pUC18质粒检测，转化效率可达108cfu/μg，-70℃保存几个月转化效率不发生改变。

基因型：rpsL (Str R) thr leu thi-1 lacY galK galT ara tonA tsx dam dcm supE44 Δ(lac-proAB) /F′ [traD36 proAB lacIq lacZΔM15]

产品特点：
1、JM 110 是一种甲基化基因dam、dcm 缺失的菌株，使DNA 不被甲基化，使用其转化所得到的质粒DNA，可被对dam、dcm 甲基化敏感的限制酶切割。
2、只适用于转化质粒DNA。
3、细胞具有硫*(代"酸")链霉素(Strr) 抗性。

操作方法：(以下操作均按无菌条件的标准进行)
1、取感受态细胞置于冰浴中，如需分装可将刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管中，置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。应注意所用DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。以下实验以100μl感受态细胞为例。
2、向感受态细胞悬液中加入目的DNA(50μl的感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和)，轻轻旋转离心管以混匀内容物，在冰浴中静置30分钟。
3、将离心管置于42℃水浴中放置45秒，然后快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却2-3分钟，该过程不要摇动离心管。
4、向每个离心管中加入500μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)， 混匀后置于37℃摇床振荡培养45分钟(150转/分钟)，目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
5、将离心管内容物混匀，吸取100μl已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的SOB或LB固体琼脂培养基上，用无菌的弯头玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。将平板置于室温直至液体被吸收，倒置平板，37℃培养12—16小时。

注意：涂布用量可根据具体实验来调整。如转化的DNA总量较多，可取更少量转化产物涂布平板；反之，如转化的DNA总量较少，可取200—300μl转化产物涂布平板。如果预计的克隆较少，可通过离心(4000 rpm, 2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。(涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的培养板)

注意事项：
1. 感受态细胞应保存在-70℃，不可多次冻融和放置时间过长，以避免感受态细胞的转化效率。
2. 进行转化操作时，应根据相应温度及无菌条件的要求进行。
3. 为防止转化实验不成功，可以保留部分连接反应液，以重新转化，将损失降到最低。

储存条件：-70℃，有效期6个月。


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腺苷脱*酶(ADA)检测试剂盒(波氏比色法)   100T
ARB12978 小鼠红细胞生成素(EPO)血清中含量检测 Mouse erythropoietin,epo ELISA KIT
乙醇溶液(75%,RNase free)   500ml
PY08-075  磷酸盐缓冲液 225ml  20瓶/箱  用作稀释液
ARB11503 人脂氧素A4(LXA4)酶免分析 Human lipoxin a4,lxa4 ELISA KIT
PY01-157  *化*(无水)  1公斤  
BTN71204 柱式凝固血液DNAOUT Column Blood Clot DNAOUT
BTN80807 动物细胞裂解液 Animal Cell Lysis Solution
十四烷基三甲基*化铵 4-Nitrophenyl α-D-mannopyranoside 1119-97-7
533-67-5 2-deoxy-D-glucose 2-脱氧-D-核糖
ARB10820 人抗红细胞抗体(RBC)检测服务 Human anti-red cell antibody ELISA KIT
5,5-二巯基-2,2-二硝基*(代"*")甲*(代"酸") Non-fat Powdered Milk 69-78-3
ARB13802 豚鼠卵清蛋白特异性IgG(OVA sIgG)elisa检测 Guinea pig ovalbumin specific igg,ova sigG ELISA KIT
二甲*青FF溶液(2.5%)   10ml
碘乙酸* Dithizone 305-53-3
D-虫荧光素游离酸 dAMP 2591-17-5
ARB14149 大鼠糖基化终末产物(AGE)Elisa定量检测 
ARB13935 猪组胺(His)代做ELISA实验 Porcine Histamine,His ELISA KIT
BL0295 1640培养基
C0401 标准新生牛血清(无菌过滤)
17372-87-1 伊红Y(水溶) Eosin Y

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