His标记蛋白质微量纯化套装折扣价

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百奥莱博专业生产供应His标记蛋白质微量纯化套装折扣价，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：His标记蛋白质微量纯化套装折扣价
产地：国产|进口
规格：2mL
品牌：百奥莱博
英文名：One-Stop His-Tagged Protein Miniprep Pack(A)
本产品基于His-Ni亲和层析的蛋白质纯化方法是目前分离纯化重组表达蛋白质的重要方法，本产品就是专门用于上述实验的一站式产品。

产品特点：
1.一站式套装，含所需的介质、溶液和层析柱，用户只需要提供表达His蛋白的细菌(酵母、杆状病毒、培养细胞)即可，非常方便。
2. 专一性强，一次过柱即可获得纯度高达95%的His-标记蛋白。
3.变性和非变性条件均可使用，也适用于纯化包涵体中的His标记蛋白。
4. 每次可以处理20mL的表达菌液，适合初步筛选和鉴定。
5. 提供4mL浓度为50%的Ni-Agarose介质，其最大载量为20-30mg His标记蛋白质/mL介质。
6. 介质为CL-6B琼脂糖，含四个Ni离子螯合基团，比只有四个Ni离子螯合基团的Ni-IDA更有效。
7. 本介质可以反复使用多次。
试剂盒组成：

 

成份	规格
Ni-Agarose介质，50%	4mL
1M咪唑溶液	25mL
1M Tris-HCl pH7.9	25mL
5M NaCl溶液	25mL
溶菌酶(20 KU/mg)	30mg(A型无)
Benzonase(2U/μL)	20μL(A型无)
盐*(代"酸")胍	6g
尿素	20g
PMSF(10mg/mL)	0.5mL
亲和层析柱，6mL	1套
使用手册	1份

储存条件：常温运输和保存，但介质需4℃保存，溶菌酶、Benzonase和PMSF需-20℃保存，有效期一年。

自备试剂：去离子水、20%乙醇、0.45μm滤膜

使用方法：
1．将Ni-Agarose介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中(介质用量需要根据His蛋白产量决定，其最大载量为20-30mg His标记蛋白质/mL介质，请根据实验需要取适量的Ni-Agarose介质加入层析柱)。
2．用5倍柱体积(指填料的体积，下同)自备去离子水洗柱，共三次。
3．用5倍柱体积的新配结合液洗柱(配方如下，以10mL为例)，共三次：

成分	用量	在结合缓冲液中浓度
1M Tri-HCl(pH7.9)	0.2mL	20mM
1M咪唑溶液	0.1mL	10mM
5M NaCl溶液	1mL	500mM
自备去离子水	8.7mL	-

4．室温5000g离心10分钟收集20mL表达菌液，弃上清，沉淀(约100mg)放冰上待用或放-80℃保存。最好用不加诱导物的菌液做对照样。
5．如果用本产品A型：加入1mL冰浴的结合液(1mL菌液需要用50μL结合液)，再加入25μL PMSF(10mg/mL)溶液，冰上超声裂解菌体直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。超声参数需根据仪器型号自行摸索，但裂解物必须不粘稠，否则会堵塞层析柱。如果用本产品B型：加入1mL冰浴的含溶菌酶的结合液(先取20mL结合液，加入所有30mg溶菌酶干粉，溶解后分装成1mL/管，剩余的-20℃放置)，再加入25μL PMSF(10mg/mL)溶液和1μL Benzonase，冰上放置30分钟。
6．4℃下13000-15000g离心10分钟，去除残留细胞和细胞碎片以防堵柱，收集上清，留样做SDS-PAGE电泳对照。如果要纯化裂解液中可溶部分的His标记蛋白，则直接进入第7步；如果要纯化裂解液中包涵体(沉淀部分)中的His标记蛋白，则直接进入第12步。

A、纯化细胞裂解液中可溶部分的His标记蛋白
7．将上步得到的上清液上柱，让重力使裂解液自然流出。如要提高His标记蛋白与介质的结合效率，可用试剂盒提供的红盖将层析柱下的漏液口堵上，让细菌裂解液和介质在4℃结合30分钟或过夜。
8．用10倍柱体积结合液洗柱(配方见上表)，收集并保存穿透液(含杂质或没被吸附的His标记蛋白，可做SDS-PAGE电泳的对照)。
9．如果用一步式洗脱法(适合已经找到最佳咪唑浓度的情况)，则直接用适量的新鲜配制的洗脱液洗柱，收集并保存穿透液(含His标记蛋白)。洗脱液的配方如下(以1mL体积和最佳咪唑浓度是500mM为例)：

成分	用量	在洗脱液中的浓度
1M Tri-HCl(pH7.9)	20μL	20mM
1M咪唑溶液	500μL	500mM
5M NaCl溶液	100μL	500mM
自备去离子水	380μL	-

10．如果用多步式洗脱(适合不知道最佳咪唑浓度或一步式洗脱杂质多的情况)，则按上表配制一系列咪唑浓度不同(如40、60、100、200、300和500mM)，其他成分浓度不变的洗液，按从低到高的顺序洗涤并收集样品，SDS-PAGE电泳检测His标记蛋白所在的区域。
11．洗脱后，依次使用10倍柱体积的去离子水洗涤柱子，再用3倍柱体积的20%乙醇平衡(乙醇要将填料浸没)，最后堵住层析柱下端的漏口，4℃保存待下次使用。

B、纯化包涵体中His标记蛋白
12．将第6步离心得到的包涵体沉淀重悬于1-3mL含盐*(代"酸")胍结合液中或1-3mL含尿素结合液中(建议优先使用尿素做变性剂，因为得到的洗脱液可以直接跑SDS-PAGE，而用盐*(代"酸")胍的洗脱液需先除盐后才能电泳)。冰浴1小时以使包涵体溶解，期间可轻柔摇晃几次。含变性剂的结合液配方如下(以10mL为例)：

成分	含盐*(代"酸")胍结合液	含尿素结合液
1M Tri-HCl(pH7.9)	200μL	200μL
5M NaCl溶液	1mL	1mL
盐*(代"酸")胍(MW=95.6)	5.7g	无
尿素(MW=60.1)	无	4.8g
自备去离子水	加水到10mL	加水到10mL

13．室温10000×g离心20分钟，沉淀为未溶解的包涵体。将上清(含溶解后的His标记蛋白)以自备的0.45μm滤膜过滤。
14．将滤过液上柱，后续纯化步骤同第7-第11步。只是所用结合液和洗脱液均含变性剂，含变性剂的洗脱液配方见下表(以1mL为例)：

成分	含盐*(代"酸")胍洗脱液	含尿素洗脱液
1M Tri-HCl(pH7.9)	20μL	20μL
1M咪唑溶液	500μL	500μL
5M　NaCl溶液	100μL	100μL
盐*(代"酸")胍(MW=95.6)	0.57g	无
尿素(MW=60.1)	无	0.48g
自备去离子水	补水到1mL	补水到1mL

注意事项：整个实验需避免含巯基乙醇、DTT和EDTA等成分。若洗脱液不能将His标记蛋白洗脱下来，可改用pH6.5- 4.5的pH递减的Tris-HCl洗脱。

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盐*(代"酸")金霉素溶液(5mg/ml) Chlortetracycline 5mg/ml 10ml
ARB13362 牛住肉孢子虫(SArcocystIs)免费代测 
BL1142 支原体检测试剂盒
BL1380 20×SSC PH7.4
盐*(代"酸")左旋咪唑 C10E6 16595-80-5
磷酸缓冲盐溶液(1×PBS,无**,RNase free)   500ml
F030704 BIOTIN标记小鼠抗HIS抗体 Monoclonal Mouse Anti-His*BIOTIN
芸香叶苷 Boc-D-serine 153-18-4或250249-75-3
9001-12-1 胶原酶Ⅴ CollagenaseⅤ
普鲁士蓝染色液(核固红法)   2×50ml|2×100ml
PY04-090  万古霉素  2mg/支×10支  每支添加于100ml Bolton肉汤基础中，用于弯曲杆菌的增菌培养
ARB11352 人类似cDNA顺序BC027382 Elisa分析 Human similar to cdna sequence bc027382 ELISA KIT
ARB12047 大鼠乙*(代"醛")脱*酶(ALDH)Elisa方法检测 Rat aldehyde dehydrogenase,aldh ELISA KIT
磷酸葡萄糖变位酶 Silver chloride 9001-81-4
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·动物RNA提取试剂盒(柱式Trizol)
编号：BTN71201
英文名称：Animal RNA column extraction kit(Trizol)
规格：50次
本试剂盒是动物总RNA快速提取试剂动物RNA提取试剂盒(BTN3070)的柱式升级产品，可用于从各种动物组织(包括白细胞)快速提取总RNA。

试剂盒特点：
1. 操作更加简单快速，整个过程只需要不到十分钟(对一个样品而言)。
2. RNA 纯度更高，OD260/OD280一般在2.0左右。
3.一般不含用RT-PCR可以检测到的基因组DNA污染。
4.适用于培养细胞、大部分动物组织和部分植物组织。
5. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA 合成等实验。
6. 性价比高于进口的柱式RNA提取产品。

试剂盒组成：

成分	50T
溶液A	50ml
溶液B	25ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
RNA 洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
下面的操作步骤是针对在1.5mL塑料离心管中进行的微量提取的，如果处理样品量大，请按比例增加各成份的用量并使用大的离心管和离心机。

1. 根据组织细胞类型的不同分为下面及种情况使用：
a)对贴壁细胞：吸尽培养液，在每10 平方厘米细胞中加入1mL溶液A，用枪轻柔吹打数次，确保细胞全部裂解。
b)对悬浮细胞：离心收集细胞，吸尽液体，在每1-5×106 悬浮细胞中加入1mL溶液A，用枪轻柔吹打数次，确保细胞全部裂解。如果是fibroblasts或carcinoma cell，1mL溶液A的细胞使用量不要超过1×106个细胞。
c)对新鲜组织：先将剪切成小块新鲜组织或液氮保存的组织放入10mL或15mL塑料离心管中，每50-100mg 组织加1mL溶液A，用匀浆器匀浆30秒左右。对肝、脾、胰、肾等细胞分裂十分旺盛的组织(细胞中含大量正在复制的DNA)，建议组织的使用量不要超过50mg/ mL溶液A，否则十分容易产生DNA污染。
d)对RNAhold 保存组织：先用纸吸去RNAhold液体后再剪切成小块，其余操作同新鲜组织的处理。
2. 将裂解物转移至一个干净的1.5mL塑料离心管中，然后加入0.2倍体积的自备*仿(1mL溶液A需0.2mL *仿)，振荡器上充分振荡混均30秒。
3. 12000rpm室温离心3～5分钟。
4. 将上清液(约0.6-0.8mL的无色透明水相，有时水相比重大时，水相在下层，有机相即蓝相在上层，吸取时应吸取透明水相)转移到一个干净的1.5mL塑料离心管中。注意：离心后下层有机相和中间层含有DNA和蛋白质，避免触及，否则将产生蛋白质和DNA污染。为保险起见，可以留下100μl上清液不取。同时吸取上清时最好缓慢进行，否则容易吸出交界面的不可见的丝状DNA。
5. 加入等体积的溶液B，充分颠倒混匀。
6. 将一半的溶液转移到离心吸附柱中，12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。
7. 将剩下的一半溶液转移到同一离心吸附柱中，12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。
8. 加0.7mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。一次洗涤一般足够去除杂质。
9. 加0.3mL 通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。此步可以省略。
10.室温12000 rmp离心半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响RNA的使用。
11. 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free 收集管中，加入50-100μL RNA 洗脱液。
12.室温12000 rmp离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
13. RNA的电泳检测：本试剂盒提取的RNA 最好用甲醛变性胶电泳，如果在非变性的普通琼脂糖胶(in TAE或TBE buffer)上电泳，一定要使用RNA 专用上样液RNAload(操作详见RNAload 使用手册)，千万不要使用常用的DNA上样液，因为DNA上样液没有经过去RNase处理，也不能将RNA变性，得到的带型将十分杂乱。
14. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。
15. RNA产量产率测定：将5-10μl RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度×体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
16. RNA 纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1 之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。

疑难解答：
Q：上样孔里的红色荧光物一定是DNA污染吗？
A：不是。用TAE或TBE电泳液和非变性胶电泳RNA时容易产生此现象，我们初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA通过碱基互补或通过硼*(代"酸")络合(如果使用TBE作电泳液的话)形成的复合物，加RNase处理后，这些红色荧光物(RNA)一般会消失。为避免此现象，建议最好使用甲醛变性胶电泳和RNA 专用上样液(如RNAload)。
Q：如何确认和去处除污染的基因组DNA？
A：如果怀疑有DNA污染，可以用RNase处理RNA样品，然后再电泳。如果上样孔里的红色荧光物不消失，则表示是基因组DNA污染。进一步确认可以使用PCR扩增法。去除污染的DNA可以使用百奥莱博的非酶的DNA去除剂DNA Scavenger或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase一般都有残留的RNase污染，所以必须严格按照厂家提供的使用说明书进行操作。


His标记蛋白质微量纯化套装折扣价关键词：BTN100102A,One-Stop His-Tagged Protein Miniprep Pack(A),His标记蛋白质微量纯化套装


·丝状真菌线粒体DNA提取试剂盒
编号：BTN130831
英文名称：Filamentous fungal mitochondria DNA extraction kit
规格：15次
线粒体是重要的、负责能量产生的极其重要的细胞器。对丝状真菌线粒体进行生化，遗传和分子生物学研究都需要先进行线粒体纯化。本产品就是基于密度梯度离心的，专门用于从丝状真菌叶片中纯化完整线粒体、再从中纯化线粒体DNA的试剂盒。

试剂盒特点：
1. 即用型试剂盒，用户不需要单独配制各种溶液。
2. 所得线粒体可用于后续的SDS-PAGE、Western、ELSIA、蛋白组分析、线粒体DNA和线粒体RNA纯化。
3. 本产品足够15次线粒体纯化和15次线粒体DNA提取，每次可处理10-20g菌丝体，能得到1-5mg左右线粒体。
4. 已经成功用于Aspergillus candidus、Aspergillus nidμLans、Magnaporthe oryzae、Neurospora crassa、Penicillium chrysogenum、Rhizopus stononifer等丝状真菌。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	250mL×2
成分B	150g
溶液C	120ml
带柄尼龙滤膜	1个
通用线粒体DNA溶液A	10ml
通用线粒体DNA溶液B	5ml
通用线粒体DNA溶液C	15ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，保存期限一年。

使用方法：
注意：纯化DNA提取用的线粒体的要求比纯化功能研究用的线粒体的要求要低，但整个操作还是最好在冰上或者在冷室进行，所用器皿和溶液最好在4℃预冷，离心最好要在4℃进行，离心力以g而不是rpm计算。

一：菌丝的摇瓶培养
1. 使用合适的丝状真菌培养基，接种孢子至终浓度为2×10E6/mL。一般100mL液体培养基可以得到0.8-1.2g菌丝体，而本方法一次可以处理10-20g菌丝体，故最好一次培养1-2升。
2.在合适的温度(如25℃、30℃或37℃，根据真菌不同而不同)250rpm/min摇晃培养16-20小时。
3. 用多层纱布或多层过滤纸过滤收集菌丝，用冰浴的自备去离子水洗涤菌丝三次去除残留的培养基。
4. 用吸水纸吸干菌丝的水分，称重后立即使用。如果在-80℃或液氮长期放置，线粒体回收效率将减低。

二：线粒体粗提液的制备
5. 制备溶液A工作液：每次提取需150mL溶液A工作液，制备方法是将20mL溶液A和130mL自备去离子水混合，冰上预冷即可。
6.在200mL烧杯中，加入100mL预冷的溶液A工作液，再加入新制备的菌丝体，然后全部转移到Waring匀浆机(家用果汁匀浆机)中，低速匀浆10秒，避免起泡沫。用玻璃棒把菌丝按入匀浆机底部后，再低速匀浆10秒。注意：还可以选择Dounce玻璃匀浆器，Polytron匀浆机和研磨(加玻璃珠)等方法，但它们单次处理量一般都较小，需多份处理再汇集。
7. 用带柄尼龙滤膜过滤匀浆液，用预冷的200mL量筒收集穿透液。
8. 将剩下的菌丝体转移到Waring匀浆机中，再加入40mL预冷的溶液A工作液，低速匀浆10秒，用上步的带柄尼龙滤膜过滤，用预冷的200mL量筒收集穿透液。注意：带柄尼龙滤膜后可反复使用。
9. 将穿透液分到4个预冷的50mL的塑料离心管中(每个约35mL)。
10.在水平转子离心机上4℃ 4000g离心10分钟，小心转移上清(含线粒体的部分)到4个新的离心管中。沉淀含细胞核和未裂解的细胞，可以弃之不用。如果要用于纯化细胞核DNA，则可以放-80℃长期保留。
11. 将含上清液的4个离心管在4℃ 10000g离心20分钟。
12. 每个离心管中加2.5mL预冷的溶液A工作液重悬线粒体沉淀并汇集(共约10mL)，此为线粒体粗提液。
13. 如果直接用线粒体粗提液提取线粒体DNA，容易有细胞核DNA污染。
 具体步骤是：在水平转子离心机上4℃ 10000g离心7分钟，小心弃上清，沉淀为线粒体，直接用于第三步的线粒体DNA提取。
14. 如果需要高纯度、无污染的线粒体DNA，则需要用密度梯度离心法将完整的线粒体和其他细胞碎片进一步分离。具体见下步线粒体精提液的制备。

三：线粒体精提液的制备(密度梯度离心法)
15. 制备重液和轻液：将4.1克成分B干粉加到6.3mL溶液C中，充分摇晃混匀得10mL重液。将4.1克成分B干粉加到6.3mL去离子水中，充分摇晃混匀得10mL轻液。
16.在50mL塑料离心管中先加入10mL重液，再在其上轻轻加上10mL轻液，最后加上第11步所得的约10mL线粒体粗提液。
17. 加平衡离心管后在水平转子冷冻超速离心机上4℃ 43000g离心2小时，重液和轻液间的带为完整线粒体。
18. 用广口吸管小心将线粒体转移到新的离心管中，加入等倍体积的预冷的溶液C，轻柔混匀。取少量在相差显微镜下检查线粒体完整性。
19.在水平转子离心机上4℃ 19000 g离心20分钟，小心将上清吸出后，线粒体沉淀可以直接用于DNA提取。

四：线粒体DNA提取
20. 将600μL通用线粒体DNA提取试剂盒溶液A加入到上步得到的线粒体沉淀中并吹打混匀，然后转移到1.5mL离心管中。
21. 65℃放置5分钟。
22. 加入300μL通用线粒体DNA提取试剂盒溶液B，震荡混匀10-30秒。
 注意：溶液B非常粘稠，可以将其预热到65℃并剪掉一截枪头后再取。
23. 加入200μL自备的*仿，震荡混匀10-30秒。
24. 12000g室温离心3分钟。此时上清液将变得透明，中间层有白膜。
25.小心转移上清液(约0.8mL)到一个新的1.5mL离心管中，避免触及中间层的白膜，可留少量上清不取。
26. 加入1倍体积的通用线粒体DNA提取试剂盒溶液C，颠倒30次混匀。
27. 12000g室温离心5分钟，小心弃上清液。
28.在离心管中加入1mL自备的75%乙醇，震荡30秒。
29. 12000g室温离心1分钟，小心弃上清液。
30. 12000g室温离心半分钟，残留液体将汇集在管底。
31. 用洗液枪吸弃管底残留液(约50μL)。
32. 加50-100μL自备的TE缓冲液，溶解DNA沉淀即得线粒体DNA溶液。直接取5-10μL电泳检测，其余放直接使用或放-80℃冰箱备用。

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