His标记蛋白质微量纯化套装厂商

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百奥莱博专业生产销*(代"售")His标记蛋白质微量纯化套装厂商，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：His标记蛋白质微量纯化套装厂商
产地：国产|进口
英文名：One-Stop His-Tagged Protein Miniprep Pack(A)
规格：2mL
编号：BTN100102A
本产品基于His-Ni亲和层析的蛋白质纯化方法是目前分离纯化重组表达蛋白质的重要方法，本产品就是专门用于上述实验的一站式产品。

产品特点：
1.一站式套装，含所需的介质、溶液和层析柱，用户只需要提供表达His蛋白的细菌(酵母、杆状病毒、培养细胞)即可，非常方便。
2. 专一性强，一次过柱即可获得纯度高达95%的His-标记蛋白。
3.变性和非变性条件均可使用，也适用于纯化包涵体中的His标记蛋白。
4. 每次可以处理20mL的表达菌液，适合初步筛选和鉴定。
5. 提供4mL浓度为50%的Ni-Agarose介质，其最大载量为20-30mg His标记蛋白质/mL介质。
6. 介质为CL-6B琼脂糖，含四个Ni离子螯合基团，比只有四个Ni离子螯合基团的Ni-IDA更有效。
7. 本介质可以反复使用多次。
试剂盒组成：

 

成份	规格
Ni-Agarose介质，50%	4mL
1M咪唑溶液	25mL
1M Tris-HCl pH7.9	25mL
5M NaCl溶液	25mL
溶菌酶(20 KU/mg)	30mg(A型无)
Benzonase(2U/μL)	20μL(A型无)
盐*(代"酸")胍	6g
尿素	20g
PMSF(10mg/mL)	0.5mL
亲和层析柱，6mL	1套
使用手册	1份

储存条件：常温运输和保存，但介质需4℃保存，溶菌酶、Benzonase和PMSF需-20℃保存，有效期一年。

自备试剂：去离子水、20%乙醇、0.45μm滤膜

使用方法：
1．将Ni-Agarose介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中(介质用量需要根据His蛋白产量决定，其最大载量为20-30mg His标记蛋白质/mL介质，请根据实验需要取适量的Ni-Agarose介质加入层析柱)。
2．用5倍柱体积(指填料的体积，下同)自备去离子水洗柱，共三次。
3．用5倍柱体积的新配结合液洗柱(配方如下，以10mL为例)，共三次：

成分	用量	在结合缓冲液中浓度
1M Tri-HCl(pH7.9)	0.2mL	20mM
1M咪唑溶液	0.1mL	10mM
5M NaCl溶液	1mL	500mM
自备去离子水	8.7mL	-

4．室温5000g离心10分钟收集20mL表达菌液，弃上清，沉淀(约100mg)放冰上待用或放-80℃保存。最好用不加诱导物的菌液做对照样。
5．如果用本产品A型：加入1mL冰浴的结合液(1mL菌液需要用50μL结合液)，再加入25μL PMSF(10mg/mL)溶液，冰上超声裂解菌体直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。超声参数需根据仪器型号自行摸索，但裂解物必须不粘稠，否则会堵塞层析柱。如果用本产品B型：加入1mL冰浴的含溶菌酶的结合液(先取20mL结合液，加入所有30mg溶菌酶干粉，溶解后分装成1mL/管，剩余的-20℃放置)，再加入25μL PMSF(10mg/mL)溶液和1μL Benzonase，冰上放置30分钟。
6．4℃下13000-15000g离心10分钟，去除残留细胞和细胞碎片以防堵柱，收集上清，留样做SDS-PAGE电泳对照。如果要纯化裂解液中可溶部分的His标记蛋白，则直接进入第7步；如果要纯化裂解液中包涵体(沉淀部分)中的His标记蛋白，则直接进入第12步。

A、纯化细胞裂解液中可溶部分的His标记蛋白
7．将上步得到的上清液上柱，让重力使裂解液自然流出。如要提高His标记蛋白与介质的结合效率，可用试剂盒提供的红盖将层析柱下的漏液口堵上，让细菌裂解液和介质在4℃结合30分钟或过夜。
8．用10倍柱体积结合液洗柱(配方见上表)，收集并保存穿透液(含杂质或没被吸附的His标记蛋白，可做SDS-PAGE电泳的对照)。
9．如果用一步式洗脱法(适合已经找到最佳咪唑浓度的情况)，则直接用适量的新鲜配制的洗脱液洗柱，收集并保存穿透液(含His标记蛋白)。洗脱液的配方如下(以1mL体积和最佳咪唑浓度是500mM为例)：

成分	用量	在洗脱液中的浓度
1M Tri-HCl(pH7.9)	20μL	20mM
1M咪唑溶液	500μL	500mM
5M NaCl溶液	100μL	500mM
自备去离子水	380μL	-

10．如果用多步式洗脱(适合不知道最佳咪唑浓度或一步式洗脱杂质多的情况)，则按上表配制一系列咪唑浓度不同(如40、60、100、200、300和500mM)，其他成分浓度不变的洗液，按从低到高的顺序洗涤并收集样品，SDS-PAGE电泳检测His标记蛋白所在的区域。
11．洗脱后，依次使用10倍柱体积的去离子水洗涤柱子，再用3倍柱体积的20%乙醇平衡(乙醇要将填料浸没)，最后堵住层析柱下端的漏口，4℃保存待下次使用。

B、纯化包涵体中His标记蛋白
12．将第6步离心得到的包涵体沉淀重悬于1-3mL含盐*(代"酸")胍结合液中或1-3mL含尿素结合液中(建议优先使用尿素做变性剂，因为得到的洗脱液可以直接跑SDS-PAGE，而用盐*(代"酸")胍的洗脱液需先除盐后才能电泳)。冰浴1小时以使包涵体溶解，期间可轻柔摇晃几次。含变性剂的结合液配方如下(以10mL为例)：

成分	含盐*(代"酸")胍结合液	含尿素结合液
1M Tri-HCl(pH7.9)	200μL	200μL
5M NaCl溶液	1mL	1mL
盐*(代"酸")胍(MW=95.6)	5.7g	无
尿素(MW=60.1)	无	4.8g
自备去离子水	加水到10mL	加水到10mL

13．室温10000×g离心20分钟，沉淀为未溶解的包涵体。将上清(含溶解后的His标记蛋白)以自备的0.45μm滤膜过滤。
14．将滤过液上柱，后续纯化步骤同第7-第11步。只是所用结合液和洗脱液均含变性剂，含变性剂的洗脱液配方见下表(以1mL为例)：

成分	含盐*(代"酸")胍洗脱液	含尿素洗脱液
1M Tri-HCl(pH7.9)	20μL	20μL
1M咪唑溶液	500μL	500μL
5M　NaCl溶液	100μL	100μL
盐*(代"酸")胍(MW=95.6)	0.57g	无
尿素(MW=60.1)	无	0.48g
自备去离子水	补水到1mL	补水到1mL

注意事项：整个实验需避免含巯基乙醇、DTT和EDTA等成分。若洗脱液不能将His标记蛋白洗脱下来，可改用pH6.5- 4.5的pH递减的Tris-HCl洗脱。

我公司的His标记蛋白质微量纯化套装厂商，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：

·X-gal干粉
编号：BTN100885
英文名称：X-Gal Powder
规格：0.5g
X-Gal的学名为5-*-4-*-3-吲哚基-β-D-半乳糖苷，分子式为C14H15BrClNO6，分子量为408.63。CAS号为7240-90-6。溶于甲醇、DMSO和二甲基甲酰胺，溶解度可达20mg/mL。

储存条件：低温运输、-20℃避光保存、有效期一年。

·SDS-PAGE电泳液(干粉)
编号：BTN81203
英文名称：SDS-PAGE Running Buffer
规格：5L
本产品为干粉型SDS-PAGE电泳液，加水配制后即可直接用于SDS-PAGE电泳，非常方便。

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

·衣霉素溶液
编号：BTN120702
英文名称：Tunicamycin Solution
规格：1mL
本产品为5mg/mL的衣霉素溶液，溶剂为甲醇。衣霉素(链病毒菌素；Nsc177382；Aids010655)，分子式：C37H60N4O16，分子量：816.89，CAS号：11089-65-9 。为放线菌Streptomyces lysosuperficus产生的核苷酸抗生素。可抑制具有被膜(envelope，含糖蛋白)的病毒的繁殖。作用机理是抑制合成糖蛋白糖链必需的拟脂(多萜醇，dolichol)中间产物的生成。常作为研究糖蛋白的工具，能通过抑制N-乙酰*基葡萄糖-1-磷酸到一磷酸长醇的转移从而阻止糖蛋白的形成。

储存条件：低温运输，4℃避光保存，有效期6个月。

·Poly(A)聚合酶
编号：BTN120509
英文名称：Poly (A) Polymerase
规格：20U
本酶催化在各种多聚核糖核酸的3´末端聚合A碱基的反应。能以单链RNA作引物，双链RNA以及合成的多聚核苷酸、短的寡聚核苷酸等不宜作引物；DNA也不能作引物。本酶因聚合AMP碱基，故只能用ATP作底物，ADP、dATP均不能作为底物。另外，UTP、CTP的掺入不足ATP的5%，而GTP也不能作为底物进行聚合。其反应原理图如下：


本产品的主要用途：
1．在RNA上加上Poly(A)尾。
2．RNA的3´末端标记。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。


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·高载量PCR片段纯化试剂盒
编号：BTN90212
英文名称：Maxi PCR Clean-Up Kit
规格：100次
本试剂盒可用于PCR产物回收，并且对于一些酶反应液回收(酶切、连接、探针标记等)也同样适用。试剂盒采用可以高效、专一结合DNA的硅胶膜。可回收50bp－40 kb的DNA片段，回收效率可达80%。得到的DNA可直接用于连接、转化、酶切、测序、杂交等分子生物学实验。

产品特点：
1.高效，回收效率高达90%。
2.快速，整个过程只需要十余分钟，可同时处理多个样品，节省时间。
3. 纯度高，本试剂盒回收的DNA可直接用于酶切、连接、PCR等多种分子生物学实验。
4. 用途广，本试剂盒能回收单链、双链及环状DNA。
5.处理量大，每个离心吸附住最多可吸附的DNA量为20μg。
6. 价格便宜，比国内绝大多数同种产品的价格便宜。
7. 储存方便，试剂盒可以在室温放置数月，不影响其质量。

试剂盒组成：

成分	100T
平衡液	50ml
通用溶胶液(专用上柱液)	30ml
离心吸附柱	100套
通用洗柱液	100ml
DNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

使用方法：
1.离心吸附柱平衡：向离心吸附柱中加入500μL的平衡液，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液。
2.在含DNA片段的PCR反应产物中，加入3倍体积的专用上柱液。
3. 60℃水浴5分钟。
4. 将离心管中的溶液转移到离心吸附柱中，套上液体收集管，静置3分钟，12000rpm离心半分钟并倒掉收集管中的液体。
5. 加入700μL 通用洗柱液于离心柱中，室温静置2分钟，12000rpm离心半分钟，倒弃收集管中的废液。
6. 12000rpm离心半分钟以去除离心柱中的残留液体。
7. 将离心柱置于一新的干净的离心管(自备)中，加入30-50μL的通用洗脱液于离心吸附柱硅胶膜的中央，静置3分钟，12000rpm离心1分钟。
8.离心管底部所得溶液即为纯化的DNA溶液，可立即用于后续实验或者放冰箱长期保存。

注意事项：
1.电泳回收DNA时，电泳缓冲液可以为TAE、TBE或者百奥莱博的DNA/RNA两用快速电泳液SuperBuffer-2，回收效果为SuperBuffer-2 最好，TAE次之，TBE最差。
2. 专用上柱液含有容易挥发物质，请密闭保存。
3.液体转移到离心柱后，可以延长静置时间使DNA与膜充分结合，提高回收效率。
4. 加专用上柱液的作用是洗盐。
5. 洗脱 DNA前的空甩很重要，以去除膜上残留酒精，否则残留酒精会影响后续DNA反应。
6. 加 TE 洗脱DNA时，最好把离心柱放入50-65℃水浴加热，但要注意把离心管密闭好；增大TE 使用量有利于回收，但要注意实际上样量与最终回收体积的关系，以便于计算回收率。TE可以用水替代，但pH不能低于7.5。

疑难解答：
Q：为何用硅胶膜吸附柱法回收TBE胶中的DNA效果不好？
A：因为TBE中的硼*(代"酸")会跟硅胶表面的OH基团反应，而这些OH 又是吸附DNA所必需的。


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·菌体内毒素清除剂
编号：BTN90901
英文名称：Bacterial Endotoxin Scavenger
规格：200mL
内毒素是E.coli细胞壁的主要成分，传统的去除内毒素的方法是将内毒素和DNA一起纯化出来，然后再用各种方法去除其中的内毒素，操作繁琐，DNA 回收率低。本产品可以直接把E.coli 表面的内毒素去除，从根本上避免了内毒素对后续操作(如质粒DNA提取，重组蛋白质提取)的污染。

产品特点：
1. 首个在菌体收集阶段去除内毒素的产品，从源头上避免了内毒素跟DNA和胞浆蛋白的接触，从根本上防止了可能产生的污染。
2. 操作简单快速，用酶溶液温和清洗菌体3-4次即可去掉细菌表面的内毒素，只需要10分钟左右时间，不需要复杂仪器设备。
3.高效，能去除99%以上的内毒素。
4.跟各种质粒DNA提取、基因组DNA提取和蛋白质提取等操作兼容，DNA丢失率只有10%左右(其他方法DNA 丢失率可以高达50%)。
5. 不影响DNA和绝大部分蛋白质的活性，处理过的质粒DNA可用于转染实验。
6. 既可小规模使用(在1.5mL离心管内)，也可放量用于大规模无内毒素质粒DNA提取和无内毒素蛋白质纯化。

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

使用方法：

一：用于菌液小于3mL的样品
1. 收集1.5-3mL E.coli 饱和菌液，12000rpm离心1分钟，弃上清，得到细菌沉淀。
2. 加入1mL 本产品温和混匀后10,000-12000rpm离心1分钟，弃上清(含内毒素)。
3. 再重复上述操作3-4次，得到的菌体可以直接进入后续的无内毒素质粒DNA提取或无内毒素蛋白质提取程序。

二：用于菌液多于3mL的样品
整个操作同上，只是在15或50mL塑料离心管中进行，离心速度不能超过离心管的承受力，本产品的用量按比例增加。

疑难解答：
Q:为何用常规的方法很难去除生物样品中的内毒素?
A:因为内毒素带电性跟DNA和部分蛋白质相同，所以基于带电性的分离方法(如硅胶膜吸附，离子交换吸附)不能将它们分开;同时内毒素又是双性分子(类似于细胞膜的磷脂分子)，能够形成大小不等的聚合物，跟质粒DNA和蛋白质大小接近，所以基于分子量大小的分离方法(如凝胶排阻过滤和*化铯超速离心)也不能将其有效分离。

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