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AFLP Kit(EcoRI-MseI)
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北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产供应北京AFLP试剂盒(EcoRI-MseI)品牌,我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂,价格优惠,欢迎广大科研工作者垂询订购。
名称:北京AFLP试剂盒(EcoRI-MseI)品牌
编号:BTN100903
品牌:百奥莱博
规格:1600次
产地:国产|进口
本产品在传统AFLP-PCR的基础上经过精心优化而开发。AFLP(amplified fragment length polymorphism)原理是一种结合RFLP和PCR技术特点的、迄今为止最有效分子标记分型技术,其原理如下:
产品特点:
1.一站式,足够50次酶切-连接反应、50次预扩反应和1600次AFLP PCR(PCR按30μL体系计算),但不包括DNA 纯化和带型分析试剂(如PAGE电泳试剂和银染试剂)。
2.本系列产品提供EcoRI-MseI 组合,适用于GC含量在50%以上的基因组。对GC含量在50%以下的基因组,需从本公司采购AFLP(EcoRI-TaqI)组合。
3.各种参数都经过优化,一次PCR所得AFLP片段数一般在10-100之间,可重复性好,误差小于0.6%。
4.本产品适用于基因组在500 Mb-6000Mb的材料(如动物和植物),对于基因组在50-500Mb的材料(如细菌和真菌)或50Mb以下的材料(如质粒,cosmid,BAC,YAC和PAC等),需要分别另购专门的+1型预扩引物混合液和+3型EcoRI引物(8 种)AFLP引物对。
试剂盒组成:
成分 | 规格 |
酶切-连接Buffer,10× | 100μl |
EcoRI-MseI酶混合液 | 100μl |
EcoRI-MseI 接头混合物 | 1ml |
T4 DNA连接酶(1U/μL) | 50μl |
+0型预扩引物混合液 | 750μl |
PCR Mix 3.0 | 9ml×3 |
对照DNA(50ng/μL) | 20μl |
+2型EcoRI引物(8条) | 1ml每种 |
+3型MseI引物(8条) | 1ml每种 |
TE溶液,pH8.0 | 10ml |
超纯水 | 10ml |
说明书 | 1份 |
引物名称 | 8条引物3´最后碱基 |
+2型EcoRI引物 | -AA,-AT,-AG,-AC,-TA,-TT,-TG,-TC |
+3型MseI引物 | -CAA,-CAC,-CAG,-CAT,-CTA,-CTC,-CTG,-CTT |
成分 | 用量 |
酶切-连接Buffer,10× | 2μl |
样品DNA | 50ng(对小基因组材料) 500ng(对大基因组材料) 如果用对照,则用5μL |
EcoR I-Mse I酶混合液 | 2μl |
超纯水 | 加水到20μl |
成分 | 体积 |
酶切-连接反应液10倍稀释液 | 5μl |
+0型预扩引物混合液 | 10μl |
PCR Mix 3.0 | 15μl |
温度 | 时间 | |
PCR(20次) | 94℃ | 30s |
56℃ | 60s | |
72℃ | 60s |
成分 | 体积 |
预扩反应液50倍稀释液 | 5μl |
+2型EcoR I引物之一(八种之一) | 5μl |
+3型Mse I引物之一(八种之一) | 5μl |
PCR Mix 3.0 | 15μl |
温度 | 时间 | |
PCR(13次) | 94℃ | 30s |
65℃ | 30s(每次循环递减0.7℃) | |
72℃ | 60s | |
PCR(13次) | 94℃ | 30s |
55℃ | 30s | |
72℃ | 60s | |
延伸 | 72℃ | 5min |
成分 | 规格 |
核酸外切酶I(5U/μl) | 150μL |
10×Buffer | 1ml |
使用手册 | 1份 |
成分 | 规格 |
Taq DNA聚合酶(5U/μL) | 100μl |
易错PCR Mix,10× | 300μl |
易错PCR专用dNTP,10× | 300μl |
MnCl2,5mM | 300μl |
说明书 | 1份 |
反应体系成分 | 20μl体系 | 终浓度 |
qPCR MagicMix,2× | 10μl | 1× |
自备引物一 | xμl | 0.1-0.5μM |
自备引物二 | xμl | 0.1-0.5μM |
自备模板 | xμl | |
自备ROX | 2μl | (可以不加) |
补超纯水到 | 20μl |
循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
酶活化 | 95℃ | 10min | 1 |
变性 | 95℃ | 15s | 35-40 |
退火&延伸 | 60℃ | 1min |
循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
酶活化 | 95℃ | 10min | 1 |
变性 | 95℃ | 10s | 35-40 |
退火 | 56-64℃ | 30s | |
延伸 | 72℃ | 32s |
循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
酶活化 | 96℃ | 10min | 1 |
变性 | 96℃ | 15s | 35-40 |
退火&延伸 | 60℃ | 1min |
我公司正在优惠促销基因结构和功能等系列产品,期待您的咨询选购北京AFLP试剂盒(EcoRI-MseI)品牌。
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