多点突变试剂盒说明书

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百奥莱博专业生产销*(代"售")多点突变试剂盒说明书，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：多点突变试剂盒说明书
编号：BTN130823
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
英文名：Multipoints Mutagenesis Kit
规格：20次
本试剂盒是利用一对设计特殊的锚定引物及几条定点突变引物对DNA多个不同位点同时进行定点突变的试剂盒。锚定引物“尾巴”上的特异性序列是与大多数基因都不相匹配的，因此保证了PCR扩增的特异性。本试剂盒的主要原理是：设计合成同一方向的锚定引物及定点突变引物，将锚定引物及定点突变引物用T4聚核苷酸激酶磷酸化后与模板质粒DNA进行退火，再使用T4 DNA聚合酶和T4 DNA连接酶进行延伸和连接形成突变单链，然后使用锚定引物“尾巴”上的特异性引物(ETail F/ETail R)和高保真DNA聚合酶对突变单链进行PCR扩增，再将获得的双链PCR产物克隆回原载体中，即可达到实验目的，获得目的突变体。原理如下图：


本试剂盒操作快速简单，只需一天时间便可以完成整个突变操作。本试剂盒尤其适用于插入片段长度在1.0 kb以下的多位点基因突变实验，对于1.0 kb以上的DNA片段的多位点基因突变，由于引物退火的不完全、PCR扩增中可能引入新的突变点等原因，可能降低实验成功率。本公司曾经使用本试剂盒，成功进行了1.5kb DNA片段的多位点基因突变实验。本试剂盒中的Anchor F1和Anchor R1引物可供克隆于pUC系列载体或pBluescript系列载体中的DNA片段的多位点基因突变实验，使用方便。使用试剂盒中的Control质粒及各种Control实验用引物可进行Control实验。

成份	规格
T4 Polynucleotide Kinase(10U/μl)	40μl
10×Reaction Buffer*1	40μl
ATP(10mM)	48μl
10×Annealing Buffer	40μl
10×Extension Buffer	60μl
T4 DNA Ligase(60U/μl)	20μl
T4 DNA Polymerase(1U/μl)	20μl
PrimeSTAR HS DNA Polymerase(2.5U/μl)	10μl
5×PrimeSTAR Buffer(Mg2+plus)	200μl
dNTP Mixture(2.5mM each)	80μl
Control Plasmid(50fmol/μl)	20μl
Control Primer Mix(12.5pmol/μl each)	20μl
Control Anchor F(8pmol/μl)	5μl
Anchor F1(8pmol/μl)*2	20μl
Anchor R1(8pmol/μl)*2	25μl
ETail F(10pmol/μl)	25μl
ETail R(10pmol/μl)	25μl
Ligation Solution I	100μl
使用手册	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

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·Tth DNA聚合酶
编号：BTN90501
英文名称：Tth DNA Polymerase
规格：250U
本酶来源于嗜热菌Thermus thermophilus HB8。在有Mg2+等二价阳离子存在的情况下，具有DNA多聚酶活性。它与Taq酶一样被广泛用于PCR反应，但耐热性比Taq酶高，因此对高GC含量模板的PCR 也有较好的效果。本酶基本上没有3´→5´外切酶活性及5´→3´外切酶活性，所以也可用于双脱氧法测序。另外，本酶具有RTase活性，在Mn2+存在的情况下，RTase活性会得到强化。利用该特性，可以用来在同一管中进行逆转录反应和PCR反应，即一步法RT PCR。(但是，在Mn2+存在时，RT-PCR的准确性不高)此外，本酶与Taq DNA多聚酶一样，PCR产物可通过T载体进行TA克隆。

产品特点：
1．RT-PCR反应的特异性增加：在较高的温度下进行逆转录，增加了引物杂交和延伸的特异性。
2．二级结构减少：在较高的温度下进行逆转录，减少了由于RNA二级结构引起的问题。

产品组成：

成分	规格
Tth DNA聚合酶(5U/μL)	50μl
10×Tth Buffer	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
以λDNA为模板，以10×Tth Buffer(+MgCl2)作为缓冲液进行体积为50μL的PCR扩增反应为例

1．按下列组份配制PCR反应液。

成分	终浓度	用量
Tth DNA聚合酶(5U/μL)	1.25U	0.25μl
10×Tth Buffer(+MgCl2)	1×	5μl
dNTP Mixture(各2.5mM)	各0.2mM	4μl
模板DNA	50pg～1μg	详见下表
引物1(10μM)	0.1～1μM	最多到1μL
引物2(10μM)	0.1～1μM	最多到1μL
灭菌蒸馏水		加到50μL

推荐50μL PCR反应体系中模板DNA推荐使用量：

哺乳动物基因组DNA	0.5～1μg
酵母基因组DNA	5～500ng
细菌基因组DNA	0.5～50ng
质粒DNA	5～500pg
PCR回收片段	1～100pg

2．PCR反应条件
以λDNA为模板，扩增1kbp的DNA片段的PCR反应条件如下：

注：PCR反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况，设定最佳的反应条件(温度、时间等)。

注意事项：
1．循环测序：该酶为耐热性酶，可通过与PCR 同样的温度条件进行测序反应。由于其高温稳定性好，对于复杂高级结构的模板效果较好。
2．引物：用于耐热性酶测序的引物需比用于非耐酶测序的引物设定更长的时间。采用较短的引物时，可能会出现不能获得条带变淡的情况。


多点突变试剂盒说明书关键词：Multipoints Mutagenesis Kit,多点突变试剂盒,BTN130823

CYB163004 羊抗人IgG-RBITC
DNA快速提取检测试剂盒 
51-21-8 5-Fluorouracil  5-*尿嘧啶
BFD039 四环素快速检测试剂盒
2-甲基*并噻唑 Abamectin 120-75-2
DP314 N96血液基因组提取试剂盒
内源性亲和素封闭液   100ml
ARB12276 大鼠纤溶酶抗纤溶酶复合物(PAP)Elisa分析 Rat plasmin-antiplasmin complex,pap ELISA KIT
22189-32-8 Spectinomycin  盐*(代"酸")壮观霉素
ARB13116 小鼠*通道阻滞剂(CCB)检测服务 Mouse calcium channel blockers,ccb ELISA KIT
ARB12234 大鼠血清总补体(CH50)ELISA代测服务 Rat 50% complement hemolysis,ch50 ELISA KIT
ARB10328 人内吗*(代"啡")肽-2(EM-2)酶联免疫定量检测 Human endomorphin-2,em-2 ELISA KIT
25988-63-0 Poly-L-Lysine  多聚-L-赖*酸(15-30万)
L-精*酸乙酯2盐*(代"酸")盐 DTNB 36589-29-4
9014-63-5 木聚糖
福尔根DNA染色液 Feulgen Staining Solution  3×50ml
SJ0837 次高分子量蛋白标准
9001-99-4 RNase A 核糖核酸酶A
BTN130551 单细胞RNA扩增试剂盒 Single Cell RNA Amplification Kit
BL1186 EB清除剂
多点突变试剂盒说明书关键词：Multipoints Mutagenesis Kit,多点突变试剂盒,BTN130823


·硫*(代"酸")卡那霉素溶液
编号：BTN60208
英文名称：Kanamycin Sulfate Solution
规格：10mL
本产品为50mg/mL的硫*(代"酸")卡那霉素溶液。用于分子生物学和组织培养(防止微生物污染和抗性筛选)。

作用原理：本品主要与细菌核糖体30S亚单位结合，引起mRNA错读。

抗性机制：抗性基因kan特异性表达一种酶(*基糖苷磷酸转移酶，如：Neomycin phosphotransferase II [NPT II/Neo])可修饰卡那霉素，阻碍其与核糖体的相互作用。

储存条件：低温运输、-20℃避光保存，有效期为6个月。

·Furin蛋白酶
编号：BTN130867
英文名称：Furin Protease
规格：50U
本产品浓度为2000U/mL的Furin蛋白酶溶液，Furin蛋白酶是一种类似枯草杆菌蛋白酶的蛋白质前体转化酶。它是分泌途径中的主要加工酶，定位于高尔基体反面的网状结构部位。其底物包括：凝血因子，血清蛋白和生长因子受体(如：胰岛素样生长因子受体)。最短的切割识别位点是：Arg-X-X-Arg。然而，该酶倾向作用于Arg-X-(Lys/Arg)-Arg位点。在 P6 位置的额外精*酸似乎能增强切割效率。Furin活性受 EGTA、α1-抗胰蛋白酶硅酸盐和聚精*酸化合物抑制。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：1单位指30℃条件下，1分钟内从荧光肽BOC-RVRR-AMC上释放1pmol AMC所需要的酶量。

注意：底物的三维结构以及切割位点周围的*基酸类型会影响 Furin蛋白酶的切割特异性。

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