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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 注册证号:
详见说明书
- 保存条件:
在-20℃或-80℃可长期保存
- 保质期:
详见说明书
- 英文名:
Fura-2 AM( 钙离子荧光探针 )1mg直销
- 库存:
51
- 供应商:
上海一研
Fura-2 AM( 钙离子荧光探针 )1mg直销注意事项:
1.从少量样品(1-10mg组织或102-104细胞)中提取RNA时可加入少许糖原以促进RNA沉淀。例如加800ml TRIzol匀浆样品,沉淀RNA前加5-10μg RNase-free糖原。糖原会与RNA一同沉淀出来,糖原浓度不高于4mg/ml是不影响第一链的合成,也不影响PCR反应。
2.匀浆后加氯仿之前样品可以在-60至-70℃保存至少一个月。RNA沉淀可以保存于75% 酒精中2-8℃一星期以上或-5至-20℃一年以上。
3.分层和RNA沉淀时也可使用台式离心机,2600×g离心30-60分钟。
Fura-2 AM( 钙离子荧光探针 )1mg直销实验步骤
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5):氯仿:异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的氯仿:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)抽提两次,氯仿:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
Fura-2 AM( 钙离子荧光探针 )1mg直销实验步骤:
1.从少量样品(1-10mg组织或102-104细胞)中提取RNA时可加入少许糖原以促进RNA沉淀。例如加800ml TRIzol匀浆样品,沉淀RNA前加5-10μg RNase-free糖原。糖原会与RNA一同沉淀出来,糖原浓度不高于4mg/ml是不影响第一链的合成,也不影响PCR反应。
2.匀浆后加氯仿之前样品可以在-60至-70℃保存至少一个月。RNA沉淀可以保存于75% 酒精中2-8℃一星期以上或-5至-20℃一年以上。
3.分层和RNA沉淀时也可使用台式离心机,2600×g离心30-60分钟。
Fura-2 AM( 钙离子荧光探针 )1mg直销特点
1.离心柱法;
2.快速:30min内即可完成全部操作;
3.得率高:无需裂解红细胞,直接从全血中提取DNA,可从0.2 mL健康人类全血中提取得到不低于3μg DNA;
4.操作简便:无需水浴,全部提取操作可在室温下进行;
5.高质量:所提取的DNA纯度高、得率高,可直接用于PCR、酶切、杂交等下游实验。
Fura-2 AM( 钙离子荧光探针 )1mg直销客户提供
●新鲜材料或正确保存条件下材料(组织、细胞、细菌等)
●4℃保存一周,-20℃保存一个月,-80℃保存一年血液样品(EDTA,肝素,柠檬酸钠抗凝)
●详细的背景资料:来源、特点、类型等
我们提供
基因组RNA/DNA提取、实验报告
质量保证
高纯度RNA/DNA、完整货期
3-5个工作日
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Fura-2 AM( 钙离子荧光探针 )1mg直销二甲基甲酰胺 进口/国产 英文名称 供残留溶剂检查用 含量: 130111-200901 规格: 20mg/支
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氯霉素 进口/国产 英文名称 效价测定 含量: 130303-200614 规格: 20mg/支
土霉素 进口/国产 英文名称 效价测定 含量: 130305-200720 规格: 20mg/支
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文献和实验留在细胞内。Fura-2可以和钙离子结合,结合钙离子后在330-350nm激发光下可以产生较强的荧光,而在380nm激发光下则会导致荧光减弱。这样就可以使用340nm和380nm这两个荧光的比值来检测细胞内的钙离子浓度,可以消除不同细胞样品间荧光探针装载效率的差异,荧光探针的渗漏,细胞厚度差异等一些误差因素。Fura-2和钙离子结合后,最大激发波长为335nm(最大激发波长随离子浓度的的不同而有所不同),最大发射波长为505nm。实际检测时推荐使用的激发波长为340nm,发射波长为510nm。如果做
rongshenghao 加入激活剂或抑制剂后打算用Fura-2或者Fluo-3测量细胞内钙离子浓度 问: 1.Fura-2和Fluo-3区别? 2.测量的是游离钙还是总钙呀? 3.还有什么需要注意的? 谢了! 2010tiger Fura-2采用双波长检测,Fluo-3是单波长检测,Fura-2的激发波长是340nm和380nm,发射波长为510nm。Fluo-3的激发波长是506nm
【求助】钙离子的测定参与者:99shaoshuai请问各位师兄,师姐,用Fura-2/AM标记,荧光双波长测细胞内钙离子浓度时,悬浮细胞时,悬浮液里含不含Ca2+,Mg2+离子?如果含Ca2+,Mg2+离子的话,会不会影响细胞内钙离子的测定?为什么?非常感谢!参与者:yangchunzhang1AM基团可以特异的标记细胞内游离钙离子,因而不用担心外液的影响。具体机制请参照染料的说明书。没有AM基团的Fura-2一般用于显微注射,对细胞的要求比较高。参与者:laugh测样品时悬液一般采用生理
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