【求助】FURA-2和FLUO-3区别？

加入激活剂或抑制剂后打算用Fura-2或者Fluo-3测量细胞内钙离子浓度
问：
1.Fura-2和Fluo-3区别？
2.测量的是游离钙还是总钙呀？
3.还有什么需要注意的？
谢了！

Fura-2采用双波长检测，Fluo-3是单波长检测，Fura-2的激发波长是340nm和380nm，发射波长为510nm。Fluo-3的激发波长是506nm，最大发射波长为526nm。Fura-2可以采用流式细胞仪检测，Fluo-3一般采用激光管聚焦或荧光显微镜检测。

内质网释放钙离子后，要把细胞浆内钙离子部分转运回内质网中

这个过程中 钙离子重新回到内质网中的量和时间关系 的曲线？

Fura-2和Fluo-3 只知道用酶标仪检测
用酶标仪检测和流式细胞仪、激光管聚焦或荧光显微镜有什么优缺点？

荧光显微镜可以检测Fluo-3？

多谢！

请问用Fluo-3/AM怎样测胞内钙的绝对值啊？

关于Fura-2

FURA-2结合Ca2+后的最大激发波长340nm，其发射荧光强度与结合Ca2+的浓度有定量关系；主要检查活细胞内Ca2+浓度及其动态变化。

Fura-2是由紫外光激发的，一般用340nm以及380nm处激发它产生的荧光比值（510 nm处检测）表示钙离子的浓度。
Fura-2即可以直接注入单个细胞内，用荧光显微镜观测Ca2+染色；也可以测定细胞悬液、组织块或贴壁细胞的细胞内Ca2+浓度。

主要特点：

? 荧光强度大，灵敏度高；

? 所用剂量小，对细胞内环境影响小；适用于活细胞

? FURA-2测定Ca2+不受细胞密度及荧光剂浓度的影响，易于识别与计算；

? 对钙的选择性高；

? 自身荧光小；

检测一般用于荧光分光光度等荧光设备；也可以用于多功能酶标仪

下面参照文献------------葡多酚对肝癌细胞增殖活性与Ca2＋浓度的影响---------使用方法：

调节细胞密度为4×106个/ml，以Fura-2/AM负载30 min后，于激发光波长分别为340 nm和380 nm，发射光波长为500 nm处测定各管荧光强度；再向各管内先后加入20 μl的Triton X-100溶液和20 μl的EGTA [Ethylene glycolbis (2-aminoethyl-ether)-N,N,N',N'-tetraacetic acid ] 溶液后，分别测定荧光强度。根据公式

Ca2＋浓度=Kd×(R-Rmin)×Fb2/[(Rmax-R)×Ff2]

式中Kd为Ca2＋结合Fura-2的解离常数，R为34 0nm与380 nm荧光强度比值。Rmax和Rmin分别为加入TritonX-100和EGTA后测定计算的R值。Ff2和Fb2分别为加入TritonX-100和EGTA前后分别测定的380 nm荧光强度。

BIOTIUM产品SCI文献中很多就是使用共聚焦显微镜等仪器；
50033 Fura-2, AM ester MSDS 10x100ug 1646

50029 Fura-2, AM ester, 1mM in anhydrous DMSO 1ml 1622