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        【求助】Fura-2AM能测线粒体内钙离子浓度吗?

        丁香园论坛

        3573
        Fura-2 AM 可以测细胞内钙离子浓度,请教各位高人,是什么机理?

        分离线粒体出来后,可以用这个染料测钙离子浓度吗?
        Fura-2 AM是一种可以穿透细胞膜的荧光染料。Fura-2 AM的荧光比较弱,最大激发波长为369nm,最大发射波长为478nm,并且其荧光不会随钙离子浓度改变而改变。Fura-2 AM进入细胞后可以被细胞内的酯酶剪切形成Fura-2,从而被滞留在细胞内。Fura-2可以和钙离子结合,结合钙离子后在330-350nm激发光下可以产生较强的荧光,而在380nm激发光下则会导致荧光减弱。这样就可以使用340nm和380nm这两个荧光的比值来检测细胞内的钙离子浓度,可以消除不同细胞样品间荧光探针装载效率的差异,荧光探针的渗漏,细胞厚度差异等一些误差因素。Fura-2和钙离子结合后,最大激发波长为335nm(最大激发波长随离子浓度的的不同而有所不同),最大发射波长为505nm。实际检测时推荐使用的激发波长为340nm,发射波长为510nm。如果做双波长检测,则推荐使用的激发波长为340nm和380nm。Fura-2的激发光谱参考下图,不同曲线表示不同钙离子浓度时的激发光谱。
        多谢。
        看来在线粒体内不能用啊……

        本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴

        师兄微信号:shixiongcoming

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