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文献和实验液为预先优化好的混合物,通常包含缓冲液、DNA聚合酶、dNTP、MgCl2及其他专利的添加剂。 一些专业人士坦言,对于多个指标,包括qPCR 效率、特异性、灵敏度、速度及耐受多个循环条件和样品类型,目前还尚未实现完美的平衡。大部分qPCR预混液能够在一些方面胜出,但很难是全部。如何选择最适合的那一个,小编下面给出了一些建议。 探针 还是染料? 当然,就多重分析而言,探针法是唯一选择。SYBR Green只适合单重反应。不过,SYBR Green的优势
%,避免引物内含有互补序列,3』端尽量不要出现含有连续三个以上的 G 或 C 的片段,真核基因设计引物时最好跨内含子哦。 选择合适 ROX 参照染料 各位同学在选购产品、做实验时,首先要弄清自己实验室的仪器对应哪种 ROX(High 还是 Low)!试剂买回来,样也加好了,最后发现不能用在自家仪器上,内心也一定是很崩溃。诺唯赞的染料法荧光定量专用预混液提供各种 ROX 供选择,如果不想这么麻烦,ChamQTM Universal SYBR® qPCR Master Mix (Q711)那是极好
Green荧光染料做常规实时定量PCR在Gene Amp® SDS 5700荧光PCR仪检测进行PCR反应初筛HLAA2与非A2,与普通PCR做对照。SYBR Green荧光PCR反应条件:94℃3分钟,然后94℃1分钟、退火温度1分钟、72℃1分钟共30个循环,72℃延伸5分钟。第一步反应的退火温度为63℃,第二步、第三步反应的退火温度为65℃,第四步反应的退火温度为64℃。 1.4.3 PCR芯片上进行SYBR Green荧光PCR反应PCR反应法同Taqman荧光PCR,探索不同反应
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