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Tris, 500 g
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Tris 碱
≥99.8%
MW 121.14
重金属（如铅） ≤2 ppm
A280 <0.02 (10% 水溶液)
白色结晶状
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文献和实验Purification of GST-fusion protein
Purification of GST-fusion protein This protocol uses Pharmacia glutathione sepharose matrix. Other companies also sells GST beads, e.g. Sigma. 1) Spin down cells and resuspend in ice-cold PBS (40 ml per 1 L of culture). Lyse
病变。 3 感染后3-5d,当1/3-1/2细胞漂浮时收集病毒。按步骤1收集细胞并准备病毒上清。通过Western blot和/或PCR鉴定重组腺病毒产生。 4 PCR鉴定重组病毒。取5µl病毒上清加入10µl蛋白酶K，55℃孵育1hr，再煮沸5min，离心后取1-2µl作PCR。 五 重组病毒扩增，纯化 1 75cm2 方瓶中接种293细胞，至密度达到90%，加入适量病毒上清感染细胞。3-4d后，细胞几乎变圆，且有一半细胞漂浮，则收集所有细胞。约500g转速离心
CsCl 1.2 （26.8 g + 92 mL 10 mM Tris-HCl，pH=7.9），再小心加入病毒上清液至体积达到20ml。平衡后，4℃下 23000rpm离心90min （SW28转头），用注射器抽吸下层蓝白色病毒带） 4、病毒透析去盐：配置透析液（10 mM Tris pH 8.0，2 mM MgCl2，5% sucrose），灭菌处理。4℃透析，更换3次透析液，可基本去除CsCl，病毒保存于-80℃。 六、病毒滴度测定（TCID50） 1 、细胞准备：96孔板中接种100μl
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