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- 单基因甲基化检测
- 2026年01月11日
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- 服务名称：
MSP
- 提供商：
广州伯信生物科技有限公司
① 活细胞：≥107 cell；
② 组织：≥0.1g/样本；
③ 物种信息、目的基因名称及ID；
伯信提供
① 实验报告（实验仪器、试剂、方法、结果、结论）；
② 克隆测序原始文件；
③ 核苷酸序列比对结果。
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文献和实验与缺点：与其他方法相比，MSP从非甲基化模板背景中检测甲基化模板的敏感性大大提高，是最敏感的甲基化测定方法。其缺点是需要两组已知的关键性CpG位点设计上下游引物，并且这些位点必须完全甲基化或完全不甲基化。事实上，能够完全满足这些条件的基因数目不多，该方法具有明显的基因“选择性”。在很多情况下，为了扩增到PCR产物，不得不降低退火温度，其后果是形成许多非特异性产物。随着退火温度的降低，该方法可靠性也随之下降。
甲基化特异性 PCR(Methylmion Specific PCR，MSP)及其改进方法是检测基因甲基化的经典方法．MSP法的原理是首先用亚硫酸氢钠修饰处理基因组DNA，所有未发生甲基化的胞嘧啶都被转化为 尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶则不变。然后设计针对甲基化和非甲基化序列的引物并进行聚合酶链反应(PCR)扩增，最后通过琼脂糖凝胶电泳分析，确定与引物互 补的DNA序列的甲基化状态。MSP法灵敏度较高，应用范围广。MSP 实验流程： 抽提基因组DNA，并定量 （组织、细胞、全血、血浆/清等）亚硫酸
甲基化 MSP 特异性 PCR 全程的常见问题与相关控制措施
是含有多个CpG位点，这样可保证引物的特异性，同时可以提高DNA启动子甲基化碱基的检出率。MSP的引物必须按亚硫酸氢钠处理后的DNA序列设计。同时也应该尽可能与普通PCR的引物设计原则相符合。按MSP的要求，任意DNA序列在做MSP扩增时，至少要合成2对引物，即甲基化引物与未甲基化引物。在MSP的未甲基化引物序列中前导引物不含鸟嘌呤碱基，反向引物不含胞嘧啶碱基。初涉及MSP者最好用文献引物进行研究。如果是为了筛选新的甲基化的抑癌基因而文献中无法找到的相应MSP引物，可用在线MethPrimer软件
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