CRISPR/Cas9基因敲除技术服务[HB-SV-KO]

CRISPR/Cas9 基因敲除原理介绍

CRISPR (clustered, regularly interspaced, short palindromic repeats)是一种来自细菌降解入侵的病毒 DNA 或其他外源 DNA 的免疫机制。

在细菌及古细菌中，CRISPR系统共分成3类，其中Ⅰ类和Ⅲ类需要多种CRISPR相关蛋白（Cas蛋白）共同发挥作用，而Ⅱ类系统只需要一种Cas蛋白即可，这为其能够广泛应用提供了便利条件。

目前，来自Streptococcus pyogenes 的CRISPR-Cas9系统应用最为广泛。Cas9 蛋白（含有两个核酸酶结构域，可以分别切割DNA 两条单链。Cas9首先与crRNA及tracrRNA结合成复合物，然后通过PAM序列结合并侵入DNA，形成RNA-DNA复合结构，进而对目的DNA双链进行切割，使DNA双链断裂。

由于PAM序列结构简单（5’-NGG-3’），几乎可以在所有的基因中找 到大量靶点，因此得到广泛的应用。

CRISPR-Cas9系统已经成功应用于植物、细菌、酵母、鱼类及哺乳动物细胞，是目前最高效的基因组编辑系统。

通过基因工程手段对crRNA和tracrRNA进行改造，将其连接在一起得到sgRNA（single guide RNA）。融合的RNA具有与野生型RNA类似的活力，但因为结构得到了简化更方便研究者使用。通过将表达sgRNA的原件与表达Cas9的原件相连接，得到可以同时表达两者的质粒，将其转染细胞，便能够对目的基因进行操作。

 

产品优势

 

a、提供多种载体供不同需要选择；

b、高效、快速、经济；

c、操作方便，易于掌握；

d、单个质粒同时表达cas9和gRNA；

e、优化的连接接头，无需酶切连接。


高效极速基因敲除神器-Crispr/Cas9 腺病毒

汉恒生物创新性的首次将cas9和gRNA整合到腺病毒载体中，成功包装cas9腺病毒和gRNA腺病毒，很大程度上弥补了crispr/cas9质粒感染效率低，从而导致敲除效率低的缺陷。

汉恒生物推出的Cas9/gRNA腺病毒利用cas9和gRNA结合特异性，同时借助腺病毒高感染效率，高表达效率，提高crispr/cas9基因敲除效率，缩短基因敲除周期，使得基因敲除周期短，成本低，更易于操作。

Crispr/Cas9腺病毒特点：

1、可感染多种分裂期和非分裂期细胞，感染效率高、敲除效率高；
2、操作简单，容易掌握；
3、基因敲除周期短，成本低；
4、适合哺乳动物不同种属不同基因的操作，适用范围广。

服务流程

 

高效极速基因敲除神器-Crispr/Cas9 慢病毒

汉恒生物独创性研发出慢病毒Cas9表达体系，该体系采用慢病毒体系先在细胞中稳定表达Cas9蛋白，构建稳定表达Cas9蛋白的细胞系，再在该细胞系的基础上导入gRNA和基因敲除实验中用到的其它原件用于特异性基因敲除。

 

产品优势

 

a、实验方案设计更灵活。由于不必表达大蛋白Cas9，可以根据细胞特性选择化学转染、腺病毒、腺相关病毒等多种方法导入或敲除相关基因；

 

b、提高基因敲除效率。在稳定表达Cas9蛋白的细胞系上进行基因敲除比瞬时转染Cas9进行基因敲除的效率更高；

 

c、可对同一细胞进行多个基因敲除实验。对于需要在同一个细胞系中进行多个基因的编辑或需要长期用一个细胞模型进行多项基因研究，先构建一个Cas9蛋白稳定表达的细胞系可显著提高后续实验的效率，降低实验难度。

 

服务特点

 

a、适用于在同一个细胞系中需要进行多个基因敲除的实验；

b、基因敲除效率比直接质粒转染更高；

c、提供多种不同荧光和抗性标记的慢病毒表达载体，更易筛选到基因敲除成功细胞；

d、接受cas9蛋白稳定表达不同细胞系定制。

 

服务流程

 

A、cas9载体构建及慢病毒包装

将cas9基因CDS区克隆至慢病毒载体，并进行cas9慢病毒包装。

 

B、稳定株筛选

将cas9慢病毒感染特定的目的细胞，进行cas9稳定表达的细胞株筛选。

CRISPR/Cas9基因敲除技术服务

 

产品及服务

 

产品	Puro标签-CRISPR/Cas9 质粒	GFP-CRISPR/Cas9 质粒
技术服务	Cas9慢病毒包装	Cas9腺病毒包装