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- DNA-蛋白质互作的文库构建
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- 2026年01月04日
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广州伯信生物科技有限公司
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CUT&Tag
Cleavage Under Target & Tagmentation (CUT&Tag)是一种新兴的研究DNA-蛋白质互作的方法，该方法使用与 Protein A/G 融合的 Tn5 转座酶，而该融合蛋白能与抗体结合，Tn5 在激活后剪切DNA-蛋白质结合位点两边序列的同时能加上测序接头，从细胞中回收 DNA 后直接进行 PCR 扩增即可完成文库构建。
基本原理
在活细胞状态下使用 ConA 磁珠固定细胞，加入洋地黄皂苷（Digitonin）透化细胞膜，依次进行 一抗、二抗、ProteinA/G 融合的转座体的孵育，随后加入 Mg2+ 激活转座酶进行片段化反应，反应产物经过 DNA 提取、PCR 扩增完成二代测序文库的构建。
技术优势
操作简便：全流程优化，磁珠提取省时安全高效;
信噪比高：背景远低于 ChIP-Seq;
样本投入量低：技术革新，细胞起始量低;
实验重复性好：平行样本之间的重复性好;
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文献和实验and attenuates host antitumor immunity[J]. Nature Immunology, 2020: 1-11. 【3】 Tao X, Feng S, Zhao T, et al. Efficient chromatin profiling of H3K4me3 modification in cotton using CUT&Tag[J]. Plant Methods, 2020, 16(1): 1-15. 文章图文来源：诺唯赞生物
, T. D., Henikoff, J. G., ... & Henikoff, S. (2019). CUT&Tag for efficient epigenomic profiling of small samples and single cells. Nature communications, 10(1), 1930. [5] Wang, Q., Xioong, H., Ai, S., Yu, X., Liu, Y., Zhang, J., & He, A. (2019
End-label oligo (20-25 mer) 4 µl 5X T4 Kinase Buffer 5 µl [gamma-32P] ATP (7000 Ci/mmol) 10 µl water + oligo (200 ng) 1 µl T4 Kinase 1. 37 deg C for 1 hour. 2. Heat inactivate at 75 deg C for 10 minutes. 3. Add 1 µl
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