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- 2025年07月14日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
2～8℃
- 保质期：
长期
- 库存：
大量
- 供应商：
康朗生物
- 规格：
10μl×20次|10μl×80次
零背景平末端克隆试剂盒
产品介绍：
本产品和传统的T4连接酶原理不同，它利用了Topoisomerase可以在瞬间（几秒钟-几分钟）、高效（接近100%）连接DNA*(代"片")段的原理采用本公司独创的工艺制成。
1. 可以在瞬间（几秒钟-几分钟）完成连接。
2. 无需冰浴和热休克，室温5分钟内完成转化；无需1小时复苏，只需37℃10分钟复苏便可以涂板。从连接到涂板只需15-20分钟。
3. 无自连、零背景，无需繁琐蓝白斑筛选，见到长出的克隆便是有插入的（接近100%）。
4. 可以连接长达10kb片段（即使连接5kb片段，挑10个菌落，至少8个是有插入的），是目前世界上最简单、最快速、零背景免筛选的TOPO 平末端克隆载体。
本产品在克隆插入位点两侧不含多克隆酶切位点，需要在PCR扩增引物上导入合适的酶切位点。此时如果使用PCR扩增引物导入的酶切位点进行DNA酶切时，酶切反应将不会受到T载体上其它多克隆酶切位点上的限制酶影响，可以大大提高酶切效率，增加亚克隆成功率。
注：本TOPO载体连接体系是按照10ml计算，如果按照其它公司产品5ml计算，实际使用次数可以增加一倍，20次实际可用40次。
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文献和实验），需要用有特定甲基化背景（dam-/dcm-）菌株扩增得到的质粒才能切割，等等，（此处省略若干连载）。 酶界之“求同存异，合作共赢” 只要“切削补”得到平末端，都能凑一起 终于盘算好能让目标片段和载体牵手了，你还得要检查一下这一轮操作插入载体后，在目标基因 ATG 前面会不会意外引入终止密码、或者不同编码框的 ATG ——提前终止或者密码“三观不一致”都可能影响后续的表达。筛选时需要有可靠的方法来验证目标片段大小是否正确、“正向插入”还是“反向插入”。有时还需要考虑 ATG 距离启动子后 SD
一、Lighteningssembly Cloning Kit 传统克隆方法：引物设计合成、PCR、连入克隆载体、酶切获得插入片段，酶切获得线性载体，连接获得重组质粒。需酶切，引物设计受酶切位点限制；需连入克隆载体；步骤多，耗时长；效率低。 北京康碧泉公司代理的Gene-Foci试剂盒的克隆方法：引物设计合成、PCR获得插入片段，PCR或酶切获得线性载体，连接获得重组质粒。无需酶切，引物设计不受酶切位点限制；无需连入克隆载体；步骤少，速度快；高连接效率，高阳性克隆
℃，而拓扑异构酶I则偏爱室温。这个室温是指22-23℃，应特别注意。很多时候我们实验室的室内温度并不满足条件。TOPO克隆得到的菌落可能不如TA克隆多，不过质量高，95%左右都是重组子。价格约为5748元/20次，时间就是金钱，这下体会到了吧。 如果你用的是高保真酶，你可以选择在PCR之后加A，或者你直接选择平端克隆试剂盒。由于载体会自连，所以平末端克隆的背景会很高。为了避免这个问题，Invitrogen开发了Zero Background(零背景)技术，用在TOPO载体上。这个技术
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