- ¥190 - 1980
- KALANG
- 中国大陆
- KL0283
- 2025年07月10日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃，避免反复冻
- 保质期：
长期
- 英文名：
Zero TOPO-Blunt Cloning Kit
- 库存：
大量
- 供应商：
康朗生物
- 规格：
20T
零背景TOPO-Blunt平末端克隆试剂盒
规格：20T英文名：Zero TOPO-Blunt Cloning Kit
编号：KL0283
本试剂盒是利用拓扑异构酶（Topoisomerase）高效快速连接DNA*(代"片")段的原理进一步研发而成，与传统的T4连接酶相比，具有以下优势：
1）快速，仅需1-5分钟即可完成连接反应。
2）高效，无自连现象，阳性克隆率接近100%，无需设置蓝白斑筛选；
3）操作简单，从连接到涂板仅需15-20min。操作过程省去冰浴、热激和1h复苏。
4）可连接长达10kb目的产物。
产品用途：平末端PCR产物的快速克隆。克隆后PCR产物的快速测序【使用M13F/M13R引物】。
产品组份：
pESI-Blunt vector 30ng/µl)————20µl
1kb control insert(40ng/µl)————5µl
10×Enhancer————————20µl
储存条件：-20℃，避免反复冻融，有效期12个月。
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文献和实验Blunt PCR克隆乃利用传统T4连接酶方法，但载体和Topo平端的一样，含ccdB基因，所以同样可降低菌落背景，易于筛选。 表10 PCR克隆试剂盒的选择 Amplification Enzyme Application of Cloned PCR Product Ligation Method Product
，ccdB基因的表达蛋白，会破坏细菌的DNA gyrase，造成细菌染色体的降解导致细菌死亡。如果有插入片断，则ccdB基因表达受到阻碍，所以细胞可生长。这样可以把高背景的缺点改善，节省筛选的时间。Topo平端克隆 与Topo TA方法一样，操作简单快速。 平端PCR 克隆 方法（Zero Blunt PCR Cloning Kit） Zero Blunt PCR 克隆 乃利用传统T4连接酶方法，但载体
），需要用有特定甲基化背景（dam-/dcm-）菌株扩增得到的质粒才能切割，等等，（此处省略若干连载）。 酶界之“求同存异，合作共赢” 只要“切削补”得到平末端，都能凑一起 终于盘算好能让目标片段和载体牵手了，你还得要检查一下这一轮操作插入载体后，在目标基因 ATG 前面会不会意外引入终止密码、或者不同编码框的 ATG ——提前终止或者密码“三观不一致”都可能影响后续的表达。筛选时需要有可靠的方法来验证目标片段大小是否正确、“正向插入”还是“反向插入”。有时还需要考虑 ATG 距离启动子后 SD
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