EASYspin组织/细胞超纯RNA快速提取试剂盒

EASYspin组织/细胞超纯RNA快速提取试剂盒

规格：20次/50次/100次
编号：KL002
本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
适用范围：
适用于从组织或细胞样品中提取无基因组DNA污染的总RNA。
储存事项：
1.所有的溶液应该是澄清的，如果环境温度低时溶液可能形成沉淀，此时不应该直接使用，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清。
2.不合适的储存于低温（4℃或者－20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15℃－25℃）进行。
3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍：
独特的裂解液RLTplus2迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶，基因组DNA在高离序盐条件下结合到基因组DNA清除柱上，未结合的总RNA然后用乙醇调节结合条件后,RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内玻璃纤维膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除， 最后低盐的RNase free H20将纯净的RNA从玻璃纤维膜上洗脱。
产品特点：
1.离心吸附柱内玻璃纤维膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.不需要使用有毒的苯酚，等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
3.快速，简捷，单个样品操作一般可在45分钟内完成。
4.基因组DNA清除柱可以有效的消除基因组DNA的污染。
5.多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值达1.9～2.0，基本无DNA残留,可用于RT-PCR，Northern-blot和各种实验。
注意事项
1.所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到12,000 rpm的传统台式离心机。
2.需要自备乙醇， β-巯基乙醇，一次性注射器（可选），研钵。
3.裂解液RLTplus 2和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）
提示：
第一次使用前请先在漂洗液RW瓶中加入指定量无水乙醇!
操作前在裂解液RLTplus2中加入β-巯基乙醇至终浓度1%，如1 ml RLTplus2 中加入10μl β-巯基乙醇。此裂解液最好现用现配。配好的RLTplus2 4℃可放置一个月。
1.组织培养细胞
a.收集<107悬浮细胞到一个1.5ml离心管，对于贴壁细胞，孔板培养可以直接裂解，细胞瓶培养应该先用胰蛋白酶消化后吹打下来收集。
b.12,000rpm离心10秒（或者300g离心5分钟），使细胞沉淀下来。完全吸弃上清，留下细胞团，注意不完全弃上清会稀释裂解液导致产量纯度降低。
c.轻弹管壁将细胞沉淀完全松散重悬，加入350μl（<5x106细胞）或者600μl（5x106-1x107细胞）裂解液RLTplus2(请确定已加入β-巯基乙醇)，吹打混匀后用手剧烈振荡20秒，充分裂解。
d.将所有裂解物上清转移至一个基因组DNA清除柱中（清除柱放入收集管中），12,000rpm离心30~60秒，收集滤液。接下步骤3
2．动物组织（例如鼠肝脑）
a.电动匀浆：新鲜组织用解剖刀迅速切成小碎块,加入350μl(<20mg组织)或者600μl(20-30mg组织)的裂解液RLTplus2后电动彻底匀浆20-40秒。
b.液氮研磨+匀浆：在液氮中研磨组织成细粉后，取适量组织细粉(20mg/30mg)转入装有350μl/600μl组织裂解液RLTplus2的1.5ml离心管中, 用手剧烈振荡20秒，充分裂解。
c.将匀浆后裂解物12,000rpm离心3分钟,沉淀可能存在的裂解困难的碎片或者不溶物, 将裂解物上清小心转到一个新离心管。
d.所有裂解物上清转移至一个基因组DNA清除柱中（清除柱放入收集管中），12,000rpm离心30~60秒，收集滤液。接下步骤3
3.较精确估计所收集的滤液体积，加入0.5体积的无水乙醇，此时可能出现沉淀,但是不影响提取过程,立即吹打混匀,不要离心。将混合物(每次小于700μl，多可以分两次加入)加入一个吸附柱RA中，（吸附柱放入收集管中）12,000 rpm离心60秒，弃掉废液。
4.向吸附柱RA中加500μl 去蛋白液RW1，室温放置30秒，12,000rpm 离心30秒，弃掉废液。
5.向吸附柱RA中加入500μl漂洗液RW（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000 rpm 离心30秒，弃掉废液。加入500μl漂洗液RW,重复一遍。
6.将吸附柱RA放回空收集管中，12,000 rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
7.取出吸附柱RA，放入一个RNase free离心管中，根据预期RNA产量在吸附膜的中间部位加30-50μl RNase free water（事先在 70-90℃水浴中加热效果更好）， 室温放置1分钟，12,000 rpm 离心1分钟。
8.如果预期RNA产量>30μg,加30-50μl RNase free water重复步骤7, 合并两次洗脱液,或者使用第一次的洗脱液加回到吸附柱重复步骤一遍(如果需要RNA浓度高)。
洗脱两遍的RNA洗脱液浓度高,分两次洗脱合并洗脱液的RNA产量比前者高15–30%,但是浓度要低,用户根据需要选择。