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- 2026年01月14日
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- 服务名称：
蛋白质胶点 / 胶条分析
- 提供商：
上海中科新生命生物科技有限公司
· 产品定义
利用LC-MS/MS蛋白鉴定技术对胶点样本（2D胶挖点）、胶条样本（即SDS-PAGE样本）进行蛋白鉴定。
· 技术路线
· 技术优势
1. 样本数目不受限制：2D胶点检测速度快，样本处理简单，通量高
2. 适合较纯或比较单一的蛋白质样品
· 数据分析
· 推荐应用领域
基础型研究：
1. 适用于样本浓度低的双向电泳2D胶点鉴定
2. 适用于鉴定IP、co-IP以及pull-down方法制备的SDS-PAGE胶条鉴定
· 送样建议
· 参考文献
1. Low ABA concentration promotes root growth and hydrotropism through relief of ABA INSENSITIVE 1-mediated inhibition of plasma membrane H+-ATPase 2.2021. Science Advances (IF 13.116) 【客户文献】
蛋白质鉴定协助研究低浓度ABA通过解除ABI1介导的质膜AHA2抑制来增强根的生长和向水性
2. Extracellular matrix protein-1 secretory isoform promotes ovarian cancer through increasing alternative mRNA splicing and stemness.2021. Nature Communications (IF 14.919) 【客户文献】
蛋白质鉴定协助研究ECM1蛋白质亚型促进卵巢癌发生的作用机制
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文献和实验完整蛋白质从 SDS-PAGE 胶中的电洗脱及其 MALDI-TOF MS 分析
[ 10，11] 。通常用可溶解硝化纤维膜（NC) 的丙酮制备基质溶液，基质-蛋白质溶液被点在样品板上用于 MALDI-TOF MS 分析，获得更好的可靠性和重复性。但是，相对于那些包含洗脱和纯化蛋白质步骤的方法而言，此方法得到的蛋白质分辨率和精确度较低 [11] 。据推测，靶中含有的硝化纤维或蛋白质与硝化纤维的相互作用可能导致了分子质量精确度的降低。 用不同电压进行电洗脱提供了一种从 1D 或 2D 聚丙烯酰胺凝胶中提取蛋白质的快速和便捷的方法。实际上，电洗脱是电泳的延续，将蛋白质从凝胶中迁移
1) 配胶：12.5%均一SDS聚丙烯酰胺凝胶，单块胶总量100 ml。 2) 灌胶：将配制好的胶液灌入模具中，至顶部3 cm左右。胶面上加入水饱和正丁醇20ul/块。2小时后，可以使用。观察凝胶，确保聚合反应均匀完全，凝胶内部没有气泡，并且凝胶的顶部表面平展。倒掉覆盖在凝胶上的溶液，用凝胶储存液冲洗凝胶表面。 3) 放置IPG胶条和加入分子量标准蛋白：将平衡后的胶条，放置于凝胶的顶部。加入分子量标准蛋白：将上样滤纸片剪成约1 X 2 mm2 ，放在玻璃板上，分子
蛋白质点的鉴定 以质谱技术为基础的蛋白质鉴定技术，由于其灵敏度高(可以达到皮摩尔)、速度快、易实现自动化已经成为蛋白质组研究中主要的蛋白质鉴定技术。将胶上蛋白质点进行蛋白酶切、回收酶切肽段后，采用MALDI―TOF―MS测定肽质量指纹谱(peptide mapping fingerprint，PMF)，或采用电喷雾串联质谱(ESI―MS―MS)测定肽序列，分别进行数据库检索，实现蛋白质的鉴定。如果是蛋白质数据库中不存在的蛋白质，还可以通过特定的检索程序进行基因数据库的分析检索
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