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LDOC1干扰慢病毒实验服务
名称: 亮氨酸拉链下调因子
描述: LDOC1 contains a leucine zipper-like motif and a proline-rich region that shares marked similarity with an SH3-binding domain. The protein localizes to the nucleus and is down-regulated in some cancer cell lines. It is thought to regulate the transcriptional response mediated by the nuclear factor kappa B (NF-kappaB). The gene has been proposed as a tumor suppressor gene whose protein product may have an important role in the development and/or progression of some cancers
参考文献: # WAVE3 functions as a negative regulator of LDOC1. J Biochem. 2005 Nov;138(5):639-46
病毒转染实验是研究目的基因、目的蛋白功能极其有效的分子生物学方法, 其原理是构建过表达或者iRNA干扰病毒质粒,根据实验需要,分别包装成腺病毒、慢病毒、逆转录病毒,感染宿主细胞或动物组织,调控宿主细胞或动物组织相应基 因表达及蛋白合成,为了解目的基因及蛋白对细胞功能的调控提供了有利的手段,广泛受到科研工作者重视及青睐,成为分 子机制研究不可缺少的重要实验手段。
服务优势:
一、一站式全套服务:可根据客户的要求,提供从克隆、病毒包装、细胞转染到稳定株筛选,直至完成体内外实验。
二、周期快:上千次病毒转染实验承接,使我们的管理、技术都达到了一个新的台阶,目前我们能够在保证优质服务的基础上,4周左右完成全部实验(含建系),极大缩短实验时间,为广大科研工作者节约宝贵的科研时间。
三、客户风险低:保证实验成功
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文献和实验感染细胞的基因组,进行长时间的稳定表达。 (2)服务流程 1)含目的基因的慢病毒RNAi干扰载体的构建和纯化提取; 2)慢病毒干扰载体、pGag/Pol、pRev、pVSV-G四质粒共转染293T细胞; 3)培养48~72h,收集培养上清; 4)病毒的纯化和浓缩(超离和/或超滤); 5)滴度测定、目的基因检定 6)将制得的慢病毒液转导客户的靶细胞,筛选混合稳定细胞株,并检测靶基因的表达。 客户提供 1)表达miRNA/shRNA的质粒(提供测序图谱)或所要
目前慢病毒载体主要应用在以下几个方面: 细胞基因治疗(截止目前,已上市的 CAR-T 产品有 9 款采用了慢病毒载体递送 CAR 基因) 基因表达调控(过表达、RNA 干扰研究等) 基因编辑(CRlSPR/Cas9 gRNA 文库筛选、基因敲除、敲入、点突变、基因激活/抑制) 稳转细胞株构建 活体细胞成像追踪 转基因动物 图 1 慢病毒载体的主要应用方向 应用案例 案例 1:用慢病毒载体进行基因过表达,构建稳转细胞株,研究葡萄糖激酶在前列腺癌(PCa)中的作用[1] 细胞
表达或小RNA干扰作用持续且稳定,并随细胞基因组的分裂而分裂(图1)。 图1 慢病毒作用机制 慢病毒载体具有宿主范围广,免疫原性低,基因容量大,可以长期表达等特点。能够有效地感染培养的肿瘤细胞、肝细胞、心肌细胞、神经元、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞。 慢病毒的感染具有整合特性,能够将外源基因有效地整合到宿主染色体上,达到持久性表达,因而可构建稳转细胞株,用于基因的细胞功能研究。使用慢病毒载体改造T细胞可用于CAR-T细胞治疗,CRISPR/Cas9文库构建使用的也是慢病毒
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