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- 保存条件：
负20度
- 保质期：
2年
- 英文名：
pMD-19T（Simple）
- 库存：
100
- 供应商：
kelei-bio
- 规格：
20μl
启动子: Lac/lac
复制子: ColE1 ori
质粒分类: 大肠杆菌载体；克隆质粒
质粒大小: 2693bp
质粒标签: LacZ
原核抗性: 氨苄青霉素Amp
克隆菌株: DH5α
培养条件: 37℃，有氧，LB
5'测序引物: M13R:CAGGAAACAGCTATGACC
3'测序引物: M13F:TGTAAAACGACGGCCAGT
备注: 制备T载体
质粒简介
pMD 19T Simple Vector是一种高效克隆PCR产物（TA Cloning）的专用载体。本载体由pUC19载体改建而成，它消除了pUC19载体上的多克隆酶切位点，再在pUC19的多克隆酶切位点导入了EcoRV酶切位点，使用EcoRV酶进行酶切反应后，再在两端的"3"末端添加一个"A"的特性，所以使用本制品可以大大提高PCR产物的连接克隆效率。
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文献和实验18/19T然后再切下来，因为可以保存引物位点（当然引物不能含酶切位点），切得是MCS提供的位点；再后来想了一个更好的办法是用M13-47和RMV引物括了再切（这两个引物在MCS以外），片断浓度大，不需提质粒，没有RNA干扰。注意不是pMD simple而是pMD，前者是没有酶切位点的。 4：连接：这是最痛心的事情，前一阵一个月没连上一个，最近两天连了三个。自己认为片断浓度问题倒是好说，但是必须保证片断的纯度。那一个月迷信ＴＡＫＡＲＡ片断回收试剂盒，方便，但是里面的醇和ＲＮＡ并没有除净；切胶回收就连上
按照TaKaRa的说明书，我用了Cool Start法，就是所有操作和试剂都是放在冰上进行的，据说能够减少非特异性。我当时担心目的基因量不够，所以P了两管，分到四个孔跑胶回收的。胶回收用的是OMEGA的试剂盒。 切胶回收之后测得目的片段浓度大概为20 ng/ul。按照TaKaRa的pMD18T说明书的要求，pMD18T需要加入1 ul，而目的片段需要0.1 pmol-0.3 pmol，换算一下，需要的目的片段的量大概为0.1*1800*325=58500 pg=58.5 ng到0.3*1800
装进病毒、最终进到靶细胞那段。 pspAX2：包装质粒，表达 gag、pol、rev 等结构蛋白和酶（含整合酶）。pspAX2 是吉凯采用的辅助质粒之一。 pMD2.G：包膜质粒，表达 VSV-G 包膜糖蛋白。VSV-G 具有较广的适用范围，让病毒能感染几乎所有哺乳动物细胞，这也是慢病毒宿主范围宽的原因。 （第四质粒视系统而定，有时 rev 独立表达；部分方案把 rev 并入 pspAX2。） 这几个质粒按比例共转染进 293T 细胞后，gag/pol 负责组装衣壳、rev 负责把未剪接的病毒
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