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- 2025年07月16日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
负20度
- 保质期：
2年
- 英文名：
pMD-19T（Simple）
- 库存：
100
- 供应商：
kelei-bio
- 规格：
20μl
启动子: Lac/lac
复制子: ColE1 ori
质粒分类: 大肠杆菌载体；克隆质粒
质粒大小: 2693bp
质粒标签: LacZ
原核抗性: 氨苄青霉素Amp
克隆菌株: DH5α
培养条件: 37℃，有氧，LB
5'测序引物: M13R:CAGGAAACAGCTATGACC
3'测序引物: M13F:TGTAAAACGACGGCCAGT
备注: 制备T载体
质粒简介
pMD 19T Simple Vector是一种高效克隆PCR产物（TA Cloning）的专用载体。本载体由pUC19载体改建而成，它消除了pUC19载体上的多克隆酶切位点，再在pUC19的多克隆酶切位点导入了EcoRV酶切位点，使用EcoRV酶进行酶切反应后，再在两端的"3"末端添加一个"A"的特性，所以使用本制品可以大大提高PCR产物的连接克隆效率。
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文献和实验18/19T然后再切下来，因为可以保存引物位点（当然引物不能含酶切位点），切得是MCS提供的位点；再后来想了一个更好的办法是用M13-47和RMV引物括了再切（这两个引物在MCS以外），片断浓度大，不需提质粒，没有RNA干扰。注意不是pMD simple而是pMD，前者是没有酶切位点的。 4：连接：这是最痛心的事情，前一阵一个月没连上一个，最近两天连了三个。自己认为片断浓度问题倒是好说，但是必须保证片断的纯度。那一个月迷信ＴＡＫＡＲＡ片断回收试剂盒，方便，但是里面的醇和ＲＮＡ并没有除净；切胶回收就连上
按照TaKaRa的说明书，我用了Cool Start法，就是所有操作和试剂都是放在冰上进行的，据说能够减少非特异性。我当时担心目的基因量不够，所以P了两管，分到四个孔跑胶回收的。胶回收用的是OMEGA的试剂盒。 切胶回收之后测得目的片段浓度大概为20 ng/ul。按照TaKaRa的pMD18T说明书的要求，pMD18T需要加入1 ul，而目的片段需要0.1 pmol-0.3 pmol，换算一下，需要的目的片段的量大概为0.1*1800*325=58500 pg=58.5 ng到0.3*1800
或者进入 google，点击」图片搜索」，直接查找图谱。 5. 寒梅砺剑阁（热心生物人整理的） http://yoou.bokee.com/5757561.html 6. 其他的一些核酸数据库 方法三：一些重要试剂公司网页 这些网站除了得到质粒图谱等信息，还可以得到关于质粒使用方面的信息，现在很多质粒，特别是应用比较广泛的质粒都一些公司商业化的质粒，基本是由一个质粒你就会联想到一个公司的名字。 比如简单的，克隆载体 pMD18-T
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