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- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
负20度
- 保质期：
2年
- 英文名：
pFastBac-GST-C
- 库存：
100
- 供应商：
kelei-bio
- 规格：
20μl
启动子: Polyhedrin
复制子: pUC ori，F1 ori
终止子: SV40 poly(A) signal
质粒分类: 昆虫细胞载体；杆状病毒组成型表达质粒
质粒大小: 5468bp
质粒标签: N-3C，N-GST
原核抗性: 氨苄青霉素Ampicillin 筛选标记: 庆大霉素Gentamicin
克隆菌株: DH5α
培养条件: 37℃，有氧，LB
表达宿主: 昆虫细胞
诱导方式: 组成型表达，无需诱导
5'测序引物: pFastbac-F: TATTCCGGATTATTCATACC
3'测序引物: pFastBac-R: ACAAATGTGGTATGGCTGA
备注: 可表达GST融合蛋白
质粒简介
The Bac-to-Bac® Baculovirus Expression System provides a rapid and efficient method to generate recombinant baculoviruses (Ciccarone et al., 1997). This method was developed by researchers at Monsanto, and is based on site-specific transposition of an expression cassette into a baculovirus shuttle vector (bacmid) propagated in E. coli (Luckow et al., 1993). The major components of the Bac-to-Bac® Baculovirus Expression System include: • A choice of pFastBac™ donor plasmids that allow generation of an expression construct containing the gene of interest where expression of the gene of interest is controlled by a baculovirus-specific promoter. • An E. coli host strain, DH10Bac™, that contains a baculovirus shuttle vector (bacmid) and a helper plasmid, and allows generation of a recombinant bacmid following transposition of the pFastBac™ expression construct.
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文献和实验【专题讨论】杆状病毒——昆虫细胞蛋白表达系统，影响蛋白表达的因素？
于100μl 无添加成分的Grace’s Medium。 b. 转染试剂充分摇匀后取6μl加入100μl 无添加成分的Grace’s Medium，混匀。 c. 将上述稀释好的质粒及稀释好的转染剂混匀，室温孵育20min。 3． 重组质粒与转染剂混合液孵育的同时，以2ml无添加成分的Grace’s Medium洗涤待转染的一孔细胞并弃去洗液。 4． 取0.8ml无添加成分的Grace’s Medium加入质粒与转染剂的混合液中，轻轻混匀后，总体积约为1ml。加入上步洗涤后的细胞孔中
Protease 是一种由人鼻病毒 14 型的 3C 蛋白酶和 GST 组成的融合蛋白。它可以特异性的将 pGEX-6P 系列等载体表达出的带有酶底物识别氨基酸序列融合蛋白的 GST 标签进行分离。由于其自身带有 GST 标签，Prescission Protease 能在单一步骤实现 GST 标签的柱上酶切和蛋白质纯化。此蛋白酶在低温条件下具有最佳活性，因此低温孵育不仅可以保证 GST 标签的高效去除，也能维持目标蛋白的活性。 Thrombin 和 Factor Xa 常温下具有较高的酶活，当选
, 8% β-mercaptoethanol；底物蛋白：根据各实验室的研究目的。实验步骤用 PAD cocktail 稀释缓冲液清洗和平衡 5µl 抗-GST 抗体交联的 Agarose Beads；混合平衡后的 5µl 抗-GST 抗体交联的 Agarose Beads 和稀释好的共 30µl PAD Cocktail，在 4°C 孵育一个小时，并进行摇晃；阴性对照，仅含有 PAD cocktail 稀释缓冲液；孵育以后 Agarose Beads 用 PAD 缓冲液进行清洗；清洗以后加入 10µl
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